還記得5月那臺(tái)被日本宇宙航空研究開發(fā)機(jī)構(gòu)(JAXA)送入太空的徠卡顯微鏡嗎?
圖1 JAXA發(fā)布了該新聞(新聞來源:JAXA)
JAXA近公開了這次太空旅行的DMi8顯微系統(tǒng)配置細(xì)節(jié),。到達(dá)空間站后,,科學(xué)家們利用這臺(tái)顯微系統(tǒng)開始了他們的測(cè)試之旅,那么他們又做了哪些研究呢,?
DMi8抵達(dá)空間站并開展活細(xì)胞觀察
近年來,,生物機(jī)體的重力感應(yīng)機(jī)制研究和用于再生醫(yī)學(xué)的高功能器官培養(yǎng)技術(shù)已成為重要的研究課題,其中活細(xì)胞活體的三維觀察是一個(gè)至關(guān)重要的研究方向,。
JAXA選擇了徠卡DMi8電動(dòng)倒置顯微鏡作為系統(tǒng)平臺(tái),,并將DMi8安裝在空間站日本實(shí)驗(yàn)倉“KIBO”中,由“KOUNOTORI” H-II運(yùn)載火箭運(yùn)送,,該運(yùn)載火箭已于5月26日到達(dá)空間站,;并且完成了一定階段的生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)。
為了滿足太空作業(yè)的要求,,以及進(jìn)行活細(xì)胞三維觀察的目的,,以DMi8為顯微平臺(tái),經(jīng)過改造和搭配多種功能配件,,整合出全新的用于生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)的實(shí)時(shí)成像系統(tǒng),,命名為COSMIC。
圖2 JAXA送入太空作業(yè)的Leica DMi8結(jié)構(gòu)示意圖
該系統(tǒng)由經(jīng)過重新設(shè)計(jì)的多種組件組成,,機(jī)身選擇了Leica DMi8倒置熒光顯微鏡,,針對(duì)太空作業(yè)目的做了部分改造。根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康目梢愿鼡Q物鏡和熒光濾光片,,并且操作部分(如鏡臺(tái),,物鏡轉(zhuǎn)盤,自動(dòng)對(duì)焦,,熒光濾鏡轉(zhuǎn)盤和聚光鏡)都是電動(dòng)的,。
細(xì)胞樣品附著在根據(jù)實(shí)驗(yàn)制造的樣品容器支架上,并裝載在顯微鏡載物臺(tái)上?,F(xiàn)有的支架可用于微孔板,,而附著的細(xì)胞可用于DCC(一次性培養(yǎng)箱),。加熱室配有兩個(gè)DCC,可以在溫度控制下進(jìn)行觀察,。
圖3樣品在顯微鏡載物臺(tái)上的具體放置
系統(tǒng)還配置了Nipo轉(zhuǎn)盤式共聚焦掃描頭和高靈敏度sCMOS相機(jī),,可以對(duì)熒光樣品進(jìn)行高清三維成像。并配備了用于快速活細(xì)胞觀察的三個(gè)激光器,,可以針對(duì)多種熒光染料進(jìn)行觀察,。此外,系統(tǒng)中內(nèi)置的分屏成像系統(tǒng)使一臺(tái)高靈敏度相機(jī)可以同時(shí)分屏捕獲具有不同波長的兩種熒光,,并且可以對(duì)高速現(xiàn)象和FRET(熒光共振能量轉(zhuǎn)移)進(jìn)行雙色同時(shí)觀察,。
圖4 空間站中完成的活細(xì)胞FRET實(shí)驗(yàn),圖為紅綠雙色同時(shí)成像
此外,,DMi8上的自動(dòng)對(duì)焦保證了長時(shí)間觀察而不會(huì)失焦,。此外,當(dāng)與加熱培養(yǎng)箱結(jié)合使用時(shí),,可以保持適合培養(yǎng)的溫度環(huán)境,,同時(shí)穩(wěn)定地進(jìn)行長時(shí)間活細(xì)胞觀察。
圖5 以DMi8為平臺(tái)改造搭建的COSMIC系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)示意圖
太空活細(xì)胞實(shí)驗(yàn)操作流程簡(jiǎn)介
那么太空上具體是如何操作實(shí)驗(yàn)的呢,?地球上的科學(xué)家又是如何獲得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的呢,?
是這樣的,這套實(shí)時(shí)顯微成像系統(tǒng)整體經(jīng)由面部緊固件安裝在“Kibo”機(jī)艙區(qū)域的墻壁上,。將細(xì)胞樣品在細(xì)胞培養(yǎng)裝置中于若干µG~2G范圍內(nèi)的各種重力環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng),,并在顯微鏡下觀察其效果。觀察時(shí),,工作人員將樣品放在顯微鏡上,,并根據(jù)地面指令遠(yuǎn)程進(jìn)行觀察。捕獲的圖像數(shù)據(jù)被暫時(shí)保存在控制PC的軌道中,,并通過地面指令將其傳輸?shù)降孛妗?/span>
圖6 太空活細(xì)胞實(shí)驗(yàn)流程示意圖
DMi8全電動(dòng)倒置顯微鏡
l 全電動(dòng)操作,,智能人機(jī)交互操控,包括全電動(dòng)DIC控制——智能電動(dòng)化更適用于地球指令太空遠(yuǎn)程操控,;
l 徠卡高精度閉環(huán)調(diào)焦技術(shù):Z軸步進(jìn)3.8nm,,重復(fù)精度20nm——助力更的三維斷層掃描;
l 堅(jiān)如磐石的機(jī)身鏡架,,配搭自動(dòng)聚焦功能和AFC自適應(yīng)追焦系統(tǒng)——為活細(xì)胞提供更穩(wěn)定的焦面,;
l 快速的EFW熒光切換技術(shù):濾色片21ms切換,可配置2ns高速光閘的LED激發(fā)光源——更適合捕捉活細(xì)胞的快速變化,;
l 更高熒光透過的光路效率,,有效降低光毒性;可作長達(dá)幾天的多位點(diǎn)活細(xì)胞連續(xù)成像且不影響生命活性;
l 雙無限遠(yuǎn)擴(kuò)展接口 (T-House),,側(cè)面和后出口均有光口自由進(jìn)入熒光光路,,左右側(cè)面及上下均可接相機(jī)及其他成像設(shè)備;更強(qiáng)大靈活的光路,,可搭建多種功能擴(kuò)展模塊,。
DMi8適用于:
活細(xì)胞觀察:多種反差觀察方法可選(PH,DIC,RC),靈活的功能配件可供選擇,。
活細(xì)胞熒光觀察:反映特異性底物的定性,,定位,定量關(guān)系,。
長達(dá)幾天的多位點(diǎn)活細(xì)胞連續(xù)成像,;多孔多位點(diǎn)的高內(nèi)涵活細(xì)胞成像。
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