人白細胞介素10(IL-10)ELISA試劑盒的原理和操作方法

檢測原理：

    本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人白細胞介素10(IL-10)水平。用純化的人白細胞介素10(IL-10)抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入人白細胞介素10(IL-10),，再與HRP標記的人白細胞介素10(IL-10)抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,，經(jīng)過che底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人白細胞介素10(IL-10)呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中人白細胞介素10(IL-10)濃度。

操作步驟：

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）,、標準孔,、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。   

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用,。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。

7.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。

8.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10-20分鐘,。

10.終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.測定：以空白孔調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

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