收集整理三類樣本的技巧: 由于ELISA實(shí)驗(yàn)只能檢測可溶性蛋白質(zhì)的含量，因此要求樣本應(yīng)清晰透明并離心除去沉淀物或懸浮物質(zhì),。為確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性,， -20℃或-80℃保存的樣本應(yīng)在1-6個月內(nèi)完成檢測,，4℃保存的樣本在一周內(nèi)完成檢測。此外,，樣本中不能含有會抑制HRP活性的NaN3,，否則會造成假陰性結(jié)果?？捎糜贓LISA實(shí)驗(yàn)的樣本一般有血清,、血漿、尿液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清以及組織勻漿等,。不同樣本類型的預(yù)處理方法也不同。適當(dāng)?shù)臉颖绢A(yù)處理是確保ELISA實(shí)驗(yàn)正確性和準(zhǔn)確性的第一步,。這里,，我們將介紹幾種不同樣本類型的處理方法。

一,、血清
血清是ELISA實(shí)驗(yàn)常-用的樣本,，其預(yù)處理也十分簡單。使用無熱原無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液樣本,，將試管或離心管在室內(nèi)溫度下放置自然凝固（視室溫環(huán)境10分鐘到2小時不等）或4℃過夜,，分離出血清，（建議傾斜試管或離心管以擴(kuò)大液面的橫截面,，使血清能更大程度的分離出來,，），2-8℃條件離心5分鐘左右（5000-6000轉(zhuǎn)/分鐘）,，仔細(xì)收集上清,，立即進(jìn)行測定，建議在-20℃或-80℃下將收集的血清分裝保存,，避免反復(fù)凍融,，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心,。

*注意事項(xiàng)：

在收集血液樣本的過程中應(yīng)避免溶血,，因?yàn)榧t細(xì)胞在溶解時會釋放具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，這種情況下,，ELISA實(shí)驗(yàn)中將會出現(xiàn)非特異性顯色反應(yīng),，導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確，出現(xiàn)假陽性結(jié)果,。另外,，樣本還應(yīng)避免細(xì)菌污染，因?yàn)榧?xì)菌可能含有內(nèi)源性HRP,，也會導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確,。

二,、血漿
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、肝素鈉,、枸櫞酸納或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，使用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液樣本，采集后30分鐘內(nèi),，混合10-20分鐘后,，2-8℃條件離心5分鐘左右（5000-6000轉(zhuǎn)/分鐘），仔細(xì)收集上清液（血漿）,，建議在-20℃或-80℃下將收集的血清分裝保存,，避免反復(fù)凍融。樣本應(yīng)避免溶血或高血脂,。保存過程中如有沉淀形成,，使用前應(yīng)該再次離心。

*注意事項(xiàng)：

檢測前請仔細(xì)閱讀ELISA試劑盒說明書,，查看該試劑盒針對抗凝劑是否有特殊要求,。

三、尿液
用無菌管收集,，2-8℃條件離心5分鐘左右（5000-6000轉(zhuǎn)/分鐘）,。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。

四、細(xì)胞培養(yǎng)上清
檢測分泌性的成份時,，用無菌管收集,。將細(xì)胞培養(yǎng)上清液吸入離心管中并以2-8℃條件離心5分鐘左右（5000-6000轉(zhuǎn)/分鐘），除去細(xì)胞碎片和雜質(zhì),，收集上清液備用,，樣本保存在-20℃或-80℃，避免反復(fù)凍融,，保存過程中如有沉淀形成,，使用前應(yīng)再次離心。

五,、腦脊液
用無菌管收集,，2-8℃條件離心5分鐘左右（5000-6000轉(zhuǎn)/分鐘），仔細(xì)收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，使用前應(yīng)再次離心。（采集大鼠腦脊液）的方法：采集腦脊液時,，用濕紗布擦試大鼠頸背部皮膚,，剪去背毛暴露皮膚,。兩耳連線剪一橫切口(1. 5cm左右),，在其中點(diǎn)向尾側(cè)沿皮下剪開2cm,，將皮分離兩側(cè)，擴(kuò)大視野,。緊貼大鼠頭骨依次逐層剪切各肌層,，并斷端依次拉向尾側(cè)擴(kuò)大視野。注意,，有出血時用干紗布按壓止血,，保持術(shù)口清晰。接近頸后黃韌帶時,，小心地用7號注射針頭分離覆蓋的肌肉,，暴露寰枕膜。用1ml注射器(針頭用止血鉗使針尖與針體成150度鈍角),，針斜面向上,，針尖-端近水平刺入蛛網(wǎng)膜下腔，固定針體,，緩慢抽取腦脊液,，一般采集量為100-200微升。)

六,、唾液

用無菌管收集,，2-8℃條件離心5分鐘左右（5000-6000轉(zhuǎn)/分鐘），仔細(xì)收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，使用前應(yīng)再次離心。