細(xì)胞系培養(yǎng)中常見的生物污染包括細(xì)菌污染、霉菌污染,、支原體污染,、黑點(diǎn)污染、真菌污染和原生動(dòng)物污染,。這些污染在細(xì)胞培養(yǎng)中的特點(diǎn)及相應(yīng)的解決辦法如下：
 

細(xì)菌污染
細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下呈黑色和細(xì)砂狀,。根據(jù)感染菌的種類不同，可能會(huì)呈現(xiàn)不同的形狀,，培養(yǎng)液一般會(huì)變得渾濁,、黃色，對(duì)細(xì)胞生長有明顯影響,。
解決方法：仔細(xì)檢查器具的滅菌情況,，確保通風(fēng)時(shí)間和高壓滅菌器的壓力是否足夠。重要的是,，與培養(yǎng)基接觸的移液管等物品如果被污染兩次,，則可能會(huì)導(dǎo)致儲(chǔ)存溶液也受到污染。所以一定要注意,！下次使用前要檢查培養(yǎng)基的渾濁度,。此外，建議在培養(yǎng)基中添加抗生素,。
 
支原體污染
支原體是隱蔽的污染物,，不能通過過濾去除。顯微鏡下沒有任何可見的支原體污染跡象,，比如細(xì)胞病變和濁度或 pH 值變化（即使在嚴(yán)重污染的培養(yǎng)基中）,，這樣就會(huì)導(dǎo)致我們產(chǎn)生錯(cuò)誤的安全感。而在牛血清中,，支原體是最常見的微生物之一,。
解決方法：通常的過濾滅菌方法對(duì)支原體沒有影響。細(xì)胞一旦被支原體污染,，特別是對(duì)重要的細(xì)胞系,，必須去除支原體，一般的方法有抗生素治療、抗血清治療和抗血清與補(bǔ)體聯(lián)合治療,。值得注意的是,，支原體突出的結(jié)構(gòu)特征是沒有細(xì)胞壁。因此,，它對(duì)作用于細(xì)胞壁的生物合成抗生素（如 β-內(nèi)酰胺類,、萬古霉素等）完-全不敏感，并且通常對(duì)多粘菌素,、利福平和磺胺類藥物具有耐藥性,。相反，四環(huán)素類和大環(huán)內(nèi)酯類抗生素對(duì)支原體的抑制作用最-強(qiáng),，而氨基糖苷類和氯霉素的抑制作用較弱,。
 
黑點(diǎn)污染
黑色的游動(dòng)點(diǎn)能穿透濾膜并在空氣中擴(kuò)散。它們?cè)诘捅剁R下顯示為黑色圓點(diǎn),，在高倍鏡下顯示為可移動(dòng)的黑色斑點(diǎn),。培養(yǎng)液也不渾濁，一般影響較小,，因此細(xì)胞仍可使用,。通常，黑點(diǎn)污染后,，細(xì)胞生長良好,，運(yùn)動(dòng)物體無明顯增加，培養(yǎng)基的顏色和透明度無明顯變化,。在同一批血清培養(yǎng)的細(xì)胞中也可以發(fā)現(xiàn)類似的現(xiàn)象,。
解決方法：黑點(diǎn)對(duì)細(xì)胞生長狀態(tài)沒有明顯影響，細(xì)胞增殖后會(huì)自然消失,，因此除了血清置換外,，無需特殊處理。細(xì)胞系如果細(xì)胞可能被小的運(yùn)動(dòng)點(diǎn)污染,，建議增加培養(yǎng)皿細(xì)胞密度,，以提高細(xì)胞存活率。
 
真菌污染
真菌污染后,，培養(yǎng)基一般清澈,，保持原色。細(xì)絲可以在顯微鏡下觀察到,。一些真菌類似于死細(xì)胞碎片,，但其中許多清晰可見，看起來像珊瑚,，比較容易區(qū)分。此外，它們會(huì)慢慢長出細(xì)細(xì)的黑色細(xì)絲,，因?yàn)樗鼈兩L得比較慢,，不像細(xì)菌那樣容易被發(fā)現(xiàn)，一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基被污染,，它們將很難存活,。
解決方法：一旦被真菌污染，果斷丟棄,，然后對(duì)細(xì)胞房,、CO2 培養(yǎng)箱、器皿和培養(yǎng)基進(jìn)行徹-底消毒,。
 
原生動(dòng)物污染
原生動(dòng)物污染后,，細(xì)胞培養(yǎng)基變得輕微渾濁。在顯微鏡下,，大量的小點(diǎn)來回移動(dòng),。細(xì)胞系雖然此時(shí)細(xì)胞仍能生長，但繁殖速度減慢,，細(xì)胞生長狀態(tài)不好,，邊緣不清，變得不透明,。原生動(dòng)物與細(xì)胞形成共生關(guān)系,。同時(shí)，原生動(dòng)物與細(xì)胞競爭營養(yǎng),。這種共生現(xiàn)象非常普遍,，但以細(xì)胞為主，因?yàn)樵鷦?dòng)物的數(shù)量相對(duì)較少,，因而對(duì)細(xì)胞的正常生長沒有影響,，只有當(dāng)它們達(dá)到一定數(shù)量時(shí)，才爆發(fā)成為惡性循環(huán),。
 
解決方法：原生動(dòng)物污染的原因有很多,，如液體消毒問題、操作問題,、環(huán)境問題等,，如果細(xì)胞足夠，果斷丟棄被污染的細(xì)胞和復(fù)蘇細(xì)胞,。如果要保留,，需要購買使用相關(guān)的滅菌試劑。