安捷倫 Seahorse XF Pro 線粒體呼吸代謝分析儀以 96 孔規(guī)格測量并報告活細(xì)胞的耗氧率 (OCR),、質(zhì)子釋放率 (PER) 或細(xì)胞外酸化率 (ECAR) 以及 ATP 產(chǎn)生速率,。該分析儀在低速率下具有出眾的 OCR 精度，具備經(jīng)驗證的儀器性能,、優(yōu)化的溫度控制,，并且兼容自動化。

OCR,、PER 和 ATP 產(chǎn)生速率是能量代謝的關(guān)鍵測量,，也是線粒體健康、毒性,、糖酵解和總體細(xì)胞功能/功能障礙的重要指標(biāo),。綜合這些檢測結(jié)果可在系統(tǒng)水平表征培養(yǎng)細(xì)胞和體外樣品的細(xì)胞代謝功能。

XF Pro 分析儀也配備良好的軟件,、標(biāo)準(zhǔn)化工作流程和安捷倫 Seahorse Analytics 軟件提供的高級數(shù)據(jù)分析功能,。這些功能極大地簡化了從檢測設(shè)計到數(shù)據(jù) QC 和解讀的整個 XF 檢測過程。

特性

• 96 孔規(guī)格的細(xì)胞能量代謝活細(xì)胞實時分析平臺

• 每個檢測孔報告多個參數(shù),，包括 OCR,、PER 或 ECAR以及 ATP 產(chǎn)生速率

• 在低速率下具有出色的OCR 精度,，提高檢測靜息細(xì)胞類型（如初始 T 細(xì)胞）時的可信度

• 高靈敏度 — 可分析定制 96 孔板中每孔僅 5,000 個細(xì)胞

• 兼容 XF Pro M板，減少邊緣效應(yīng)

• 具有自動混合功能的四加藥口系統(tǒng),，能評估細(xì)胞對底物,、抑制劑及其他化合物的即時反應(yīng)

• 經(jīng)驗證的儀器性能，確保板內(nèi)和板間數(shù)據(jù)一致性

• 4 至 30 °C 的寬工作環(huán)境溫度,，使該分析儀可維持 16 至 42 °C 的內(nèi)部檢測溫度

• 良好的 Pro Controller 軟件,，具有用戶引導(dǎo)界面，可方便地創(chuàng)建檢測方案

• 在 Wave Pro 軟件中查看數(shù)據(jù)質(zhì)量,，自動標(biāo)記異常值

性能指標(biāo)

工作原理

實時監(jiān)測微孔板中的活細(xì)胞生物能量代謝

線粒體呼吸和糖酵解這兩個主要的能量產(chǎn)生途徑,，分別涉及細(xì)胞耗氧量和質(zhì)子釋放率,。Seahorse XF 技術(shù)使用無標(biāo)記傳感器檢測這些分析物中的細(xì)胞外變化，以測定細(xì)胞呼吸率,、糖酵解和 ATP 產(chǎn)生,。將細(xì)胞接種于定制 96 孔 XF 微孔板的分析孔中，融合率為 50%–90%,。懸浮細(xì)胞附著在孔底,，實現(xiàn)靈敏度優(yōu)化。

形成微室,，并以分鐘為單位計算細(xì)胞外流量的速率

儀器將探針板降低至分析孔中,。傳感器位于孔底上方 200 µm 處，形成約 2 µL 的瞬時微室,。隨著氧氣和 pH 水平的變化,，儀器可讀取傳感器的相應(yīng)變化。通常進(jìn)行 3 分鐘測量,，然后自動計算速率,。測量期結(jié)束后，升高探針,，使細(xì)胞外培養(yǎng)基恢復(fù)到基線條件,。

最多注入 4 種化合物，實時測試響應(yīng)或研究生物學(xué)機(jī)理

探針板還配置有加藥口（每孔 4 個）,，可在分析過程中將調(diào)節(jié)因子注入細(xì)胞孔中,。當(dāng)完成儀器方案配置后，系統(tǒng)會將化合物“A"注入分析孔中,，緩慢混合,，確保化合物在分析培養(yǎng)基中均勻分布。所有孔以此方式同步處理,。系統(tǒng)將自動執(zhí)行后續(xù)測量周期,、方案規(guī)定的任何額外加藥及速率計算。

如何測量細(xì)胞外代謝流

安捷倫 Seahorse XF 線粒體呼吸代謝分析儀以 5–8 分鐘左右的間隔測量耗氧率 (OCR) 和細(xì)胞外酸化率 (ECAR),。OCR 是線粒體呼吸作用的指標(biāo),，而 ECAR 主要由糖酵解產(chǎn)生。

通過隔離微孔板中單層細(xì)胞上極少量（約 2 μL）的培養(yǎng)基,，實時測量 OCR 和 ECAR。

細(xì)胞耗氧量（呼吸）和質(zhì)子分泌（糖酵解）導(dǎo)致“瞬態(tài)微室"中溶解氧和游離質(zhì)子的濃度發(fā)生快速且易測量的變化,，可由位于單層細(xì)胞上方 200 微米的固態(tài)傳感器探針每隔數(shù)秒進(jìn)行測量,。儀器進(jìn)行 2–5 分鐘的濃度測量，然后分別計算 OCR 和 ECAR,。

測量完成后,，探針抬起，使得上部更多的培養(yǎng)基可進(jìn)入并與瞬態(tài)微室中的培養(yǎng)基混合,，恢復(fù)細(xì)胞微環(huán)境至基線水平,。集成的加藥系統(tǒng)可以按照用戶設(shè)置的間隔向每個孔中依次加入多達(dá) 4 種化合物。

應(yīng)用

探索細(xì)胞代謝的強(qiáng)大功能

安捷倫 Seahorse XF 平臺可實時測量活細(xì)胞的兩個主要代謝通路（線粒體呼吸和糖酵解）,，提供細(xì)胞生物能量代謝的功能動力學(xué)測量,。了解生物能量參數(shù)如何提供有價值的信息，并作為疾病模型,、關(guān)鍵細(xì)胞過程和療法發(fā)現(xiàn)的指標(biāo),。

免疫代謝

包括激活、增殖和記憶細(xì)胞發(fā)育在內(nèi)的免疫細(xì)胞過程都是由代謝重編程驅(qū)動的,，代謝重編程可以被調(diào)節(jié)以增強(qiáng)性能和控制免疫細(xì)胞結(jié)局,。通過功能性實時代謝測量，了解激活,、增殖和記憶細(xì)胞發(fā)育等免疫細(xì)胞過程,。

癌癥代謝

新陳代謝是癌癥惡性腫瘤細(xì)胞生長的關(guān)鍵驅(qū)動因素，為了總體上向糖酵解表型轉(zhuǎn)換,，癌細(xì)胞增殖通常需要進(jìn)行上調(diào)或“代謝轉(zhuǎn)換",，從而加快能量需求并生成結(jié)構(gòu)單元，最終促進(jìn)癌細(xì)胞生長,。通過對活細(xì)胞進(jìn)行實時功能性生物能量代謝分析,，揭示癌癥代謝特性，更深入地了解癌細(xì)胞生物學(xué),。