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人腎小管類器官培養(yǎng)試劑盒

MCE 國(guó)際站：Human Kidney Tubular Organoid Kit

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲(chǔ)條件：Basal Medium A : 4℃, 1 year. Shipping with blue ice.Supplement B (50x) & Supplement C (250x) : -20°C, 1 year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. Shipping with dry ice.

簡(jiǎn)介：MCE 人腎小管類器官培養(yǎng)試劑盒包含腎小管類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 以及培養(yǎng)添加物 B (50x) 和培養(yǎng)添加物 C (250x),。該產(chǎn)品可有效構(gòu)建人腎小管類器官。

概述：MCE 人腎小管類器官培養(yǎng)試劑盒包含人腎小管類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A,、培養(yǎng)添加物 B (50x) 和培養(yǎng)添加物 C (250x),。該產(chǎn)品可用于有效構(gòu)建人腎小管類器官。人腎小管類器官由腎小管細(xì)胞或干細(xì)胞通過自組裝形成的,，其結(jié)構(gòu)和功能類似于真實(shí)的腎小管,。由原代組織細(xì)胞構(gòu)建的腎小管類器官可用于研究腎小管發(fā)育、疾病建模,、藥物篩選,、毒性測(cè)試和個(gè)體化醫(yī)學(xué)研究

描述：

•   MCE 人腎管狀類器官試劑盒包含人腎管狀類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A、人腎管狀類器官補(bǔ)充劑 B (50x),、人腎管狀類器官補(bǔ)充劑 C (250x),。本產(chǎn)品可用于高效構(gòu)建人腎管狀類器官,。

•   腎管狀類器官 (tubuloids) 的結(jié)構(gòu)和功能與真實(shí)腎小管相似。人腎管狀類器官可用于許多應(yīng)用,，例如器官發(fā)育,、疾病建模、藥物篩選,、腎毒性測(cè)試和再生療法,。

操作說明：1. 配制人腎小管類器官培養(yǎng)基冰上解凍人腎小管類器官培養(yǎng)添加物 B、人腎小管類器官培養(yǎng)添加物 C,，按下列組分配制人腎小管類器官培養(yǎng)基,，充分混勻后置于冰上備用,。2. 提取原代組織細(xì)胞a. 使用預(yù)冷的原代組織儲(chǔ)存液浸泡新鮮提取的原代人腎小管組織,，并置于 4°C 冰箱中暫時(shí)保存。b. 在保證無菌條件下,，使用人腎小管類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 或者 PBS 沖洗干凈去除脂肪或肌肉等非上皮組織成分后的原代人腎小管組織,，直到上清澄清。然后在細(xì)胞培養(yǎng)皿中用無菌剪刀將其切成盡可能小的直徑約為約 2-3 mm 的碎片,，隨后轉(zhuǎn)移至含有 10 mL 預(yù)冷 1% FBS 人腎小管類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 的 15 mL 錐形管中,。c. 取適量人腎小管類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 加入 FBS 制備 10% FBS 培養(yǎng)基，在后續(xù)步驟中,，使用 10% FBS 培養(yǎng)基潤(rùn)洗 10 mL 移液管的內(nèi)表面以避免組織粘在移液管壁上,。d. 用 10 mL 移液管清洗樣品至少 10 次，靜置使樣品沉淀在底部,，用 10 mL 移液管吸去上清,。e. 加入適量組織消化液，消化液體積不超過錐形管體積的三分之二,。在 37°C 下?lián)u床低速孵育一定時(shí)間,，一般不超過 30 分鐘，密切關(guān)注消化情況,。f. 當(dāng)出現(xiàn)導(dǎo)管結(jié)構(gòu)時(shí),，加入終濃度為 2% 的 FBS 停止消化，然后輕輕地吹打混勻,。靜置錐形管 2 分鐘,，將上清液轉(zhuǎn)移至新的錐形管內(nèi)。向錐形管內(nèi)加入10 mL 人腎小管類器官培養(yǎng)基 A 重懸,，后靜置 1-2 分鐘,，轉(zhuǎn)移上清至新的錐形管。重復(fù)該步驟 1-2 次,。g. 使用低溫離心機(jī)將收集到的上清液在 4°C 溫度下以 300 g 離心 3 分鐘后收集細(xì)胞沉淀,。重復(fù)該步驟 1-2 次,，收集細(xì)胞沉淀。3. 構(gòu)建類器官a. 在冰上將收集的原代組織細(xì)胞重懸于基質(zhì)膠中,，推薦重懸密度為每 50 μL 含有 50-200 個(gè)導(dǎo)管,。建議使用基質(zhì)膠原液重懸腫瘤細(xì)胞，如需稀釋,，請(qǐng)確?；|(zhì)膠體積與稀釋所用的類器官培養(yǎng)基體積的比例高于 2:1。b. 將混懸液迅速注入 24 孔細(xì)胞培養(yǎng)板的底部,，盡量避免產(chǎn)生氣泡,，每孔注入 25-35 μL 混懸液。隨后將細(xì)胞培養(yǎng)板放入 37°C,，5% CO2 的培養(yǎng)箱中孵育 15-25分鐘進(jìn)行固化,。c. 待基質(zhì)膠凝固后，在每個(gè)孔邊緣緩慢注入 500 μL 預(yù)熱的人腎小管類器官培養(yǎng)基,，避免破壞已有的凝膠結(jié)構(gòu),，然后將細(xì)胞培養(yǎng)板放回 37°C，5% CO2 的培養(yǎng)箱中,。d. 密切關(guān)注類器官生長(zhǎng)狀態(tài),，每隔 3 天更換一次培養(yǎng)基。一般情況下,，5-8 天可觀察到人腎小管類器官生成,，并進(jìn)行第一次傳代。4. 類器官傳代a. 吸去上層培養(yǎng)基,，向孔中加入 500 μL 預(yù)冷人腎小管類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A,，使用細(xì)胞刮刀或 1 mL 移液槍槍頭吹打從而將細(xì)胞培養(yǎng)孔內(nèi)容物剝離出培養(yǎng)板并轉(zhuǎn)移至 1.5 mL EP 管內(nèi)。b. 使用移液槍充分吹打混勻至類器官與基質(zhì)膠分離,，250-300 g 離心 3 分鐘收集沉淀,。隨后加入 1 mL 類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 重懸并輕柔地進(jìn)行充分吹打，使類器官分散為碎片,。如類器官難以吹打成碎片可使用 5 倍體積的類器官消化液置于 37°C 培養(yǎng)箱中充分消化,，一般不超過 3 分鐘，隨后加入 1 mL 類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 終止消化,。c. 在室溫下以 200-250 g 離心 3 分鐘,。離心完畢，棄上清,，用人腎小管類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 或 PBS 清洗 1-2 次后備用,。d. 在冰上將收集的細(xì)胞重懸于基質(zhì)膠中，推薦重懸密度為每 50 μL 含有 40-200 個(gè)導(dǎo)管。建議使用基質(zhì)膠原液重懸腫瘤細(xì)胞,，如需稀釋,，請(qǐng)確保基質(zhì)膠體積與稀釋所用的類器官培養(yǎng)基體積的比例高于 2:1,。e. 將混懸液迅速注入 24 孔細(xì)胞培養(yǎng)板的底部,，盡量避免產(chǎn)生氣泡，每孔注入 25-35 μL 混懸液,。隨后將細(xì)胞培養(yǎng)板放入 37°C,，5% CO2 的培養(yǎng)箱中孵育 15-25分鐘進(jìn)行固化。f. 待基質(zhì)膠凝固后,，在每個(gè)孔邊緣緩慢注入 500 μL 預(yù)熱的人腎小管類器官培養(yǎng)基,，避免破壞已有的凝膠結(jié)構(gòu)，然后將細(xì)胞培養(yǎng)板放回 37°C,，5% CO2 的培養(yǎng)箱中,。g. 密切關(guān)注類器官的生長(zhǎng)狀態(tài)，記錄多個(gè)視野中的腎小管類器官的形態(tài)和分布,。

注意事項(xiàng)：1. 配制后的培養(yǎng)基不建議在 4°C 冰箱中放置超過 2 周,。2. 提取原代組織細(xì)胞時(shí)需保持全程無菌,，避免造成后續(xù)實(shí)驗(yàn)污染,。3. 類器官傳代消化時(shí)需時(shí)刻觀察碎片狀態(tài)，出現(xiàn)小細(xì)胞團(tuán)（10-50 個(gè)細(xì)胞）時(shí)應(yīng)終止消化,，避免時(shí)間過長(zhǎng)影響類器官后續(xù)生長(zhǎng)活力,。4. 基質(zhì)膠操作需全程保持低溫避免凝膠，與細(xì)胞重懸后應(yīng)將其迅速注入細(xì)胞培養(yǎng)孔內(nèi),，盡量避免產(chǎn)生氣泡,。5. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療,，不得用于食品或藥品6. 為了您的安全和健康,，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

銷售產(chǎn)品：[10]-Shogaol  | Aloin  | Indole-3-acetamide  | PNGase F, F. meningosepticum (His)  | Metoclopramide  | Permethrin  | Methazolamide  | Spermine (tetrahydrochloride)  | Tyramine  | BAY1125976

Trending products：Recombinant Proteins  |  Bioactive Screening Libraries  |  Natural Products  |  Dye Reagents  |  PROTAC  |  Isotope-Labeled Compounds