人胰腺類器官培養(yǎng)試劑盒
MCE 國際站：Human Pancreatic Organoid Kit
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件：Basal Medium A : 4℃, 1 year. Shipping with blue ice.Supplement B (50x) & Supplement C (250x) : -20°C, 1 year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. Shipping with dry ice.
簡介：MCE 人胰腺類器官培養(yǎng)試劑盒包含胰腺類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 以及培養(yǎng)添加物 B (50x) 和培養(yǎng)添加物 C (250x),。該產(chǎn)品可有效構(gòu)建人胰腺類器官。
概述：MCE 人胰腺類器官培養(yǎng)試劑盒包含人胰腺類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A,、培養(yǎng)添加物 B (50x) 和培養(yǎng)添加物 C (250x),。該產(chǎn)品可用于有效構(gòu)建人胰腺類器官。由原代組織細(xì)胞構(gòu)建的胰腺類器官在細(xì)胞類型,、結(jié)構(gòu)和功能上表現(xiàn)出導(dǎo)管上皮的特征,，可作為研究胰腺發(fā)育、疾病建模,、藥物發(fā)現(xiàn)和個性化醫(yī)療的有力工具。
描述：
• MCE 人胰腺類器官試劑盒包含人胰腺類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A,、人胰腺類器官補(bǔ)充劑 B（50 倍）和人胰腺類器官補(bǔ)充劑 C（250 倍）,。本產(chǎn)品可用于高效構(gòu)建人胰腺類器官。
• 人胰腺類器官是體外和體內(nèi)模型之間重要的轉(zhuǎn)化橋梁,，增強(qiáng)了我們對胰腺細(xì)胞生物學(xué)的理解,。來自原代組織的胰腺類器官可用于胰腺發(fā)育研究、疾病建模,、藥物發(fā)現(xiàn),、組織再生研究和個性化醫(yī)療。
操作說明：1. 配制人胰腺類器官培養(yǎng)基冰上解凍人胰腺類器官培養(yǎng)添加物 B,、人胰腺類器官培養(yǎng)添加物 C,，按下列組分配制人胰腺類器官培養(yǎng)基，充分混勻后置于冰上備用2. 提取原代組織細(xì)胞a. 使用預(yù)冷的原代組織儲存液浸泡新鮮提取的原代人胰腺組織,，并置于 4°C 冰箱中暫時保存,。b. 在保證無菌條件下，使用人胰腺類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 或者 PBS 沖洗干凈去除脂肪或肌肉等非上皮組織成分后的原代人胰腺組織,，直到上清澄清,。然后在細(xì)胞培養(yǎng)皿中用無菌剪刀將其切成盡可能小的直徑約為約 2-3 mm 的碎片，隨后轉(zhuǎn)移至含有 10 mL 預(yù)冷 1% FBS 人胰腺類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 的 15 mL 錐形管中。c. 取適量人胰腺類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 加入 FBS 制備 10% FBS 培養(yǎng)基,，在后續(xù)步驟中,，使用 10% FBS 培養(yǎng)基潤洗 10 mL 移液管的內(nèi)表面以避免組織粘在移液管壁上。d. 用 10 mL 移液管清洗樣品至少 10 次,，靜置使樣品沉淀在底部,，用 10 mL 移液管吸去上清。e. 加入適量組織消化液,，消化液體積不超過錐形管體積的三分之二,。在 37°C 下?lián)u床低速孵育一定時間，一般不超過 30 分鐘,，密切關(guān)注消化情況,。f. 一旦導(dǎo)管結(jié)構(gòu)出現(xiàn)，加入終濃度為 2% 的 FBS 停止消化,，然后輕輕地吹打混勻,。靜置錐形管 2 分鐘，將上清液轉(zhuǎn)移至新的錐形管內(nèi),。向錐形管內(nèi)加入 10 mL 人胰腺類器官培養(yǎng)基 A 重懸,，后靜置 1-2 分鐘，轉(zhuǎn)移上清至新的錐形管,。重復(fù)該步驟 1-2 次,。g. 使用低溫離心機(jī)將收集到的上清液在 4°C 溫度下以 300 g 離心 3 分鐘后收集細(xì)胞沉淀。加入 10 mL 人胰腺類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 重懸,，重復(fù)該離心步驟 1-2 次,，收集細(xì)胞沉淀。3. 構(gòu)建類器官a. 在冰上將收集的原代組織細(xì)胞重懸于基質(zhì)膠中,，推薦重懸密度為每 50 μL 含有 50-200 個導(dǎo)管,。建議使用基質(zhì)膠原液重懸腫瘤細(xì)胞，如需稀釋,，請確?；|(zhì)膠體積與稀釋所用的類器官培養(yǎng)基體積的比例高于 2:1b. 將混懸液迅速注入 24 孔細(xì)胞培養(yǎng)板的底部，盡量避免產(chǎn)生氣泡,，每孔注入 25-35 μL 混懸液,。隨后將細(xì)胞培養(yǎng)板放入 37°C，5% CO2 的培養(yǎng)箱中孵育 15-25分鐘進(jìn)行固化,。c. 待基質(zhì)膠凝固后,，在每個孔邊緣緩慢注入 500 μL 提前制備好的人胰腺類器官培養(yǎng)基，避免破壞已有的凝膠結(jié)構(gòu),，然后將細(xì)胞培養(yǎng)板放回 37°C,，5% CO2 的培養(yǎng)箱中,。d. 密切關(guān)注類器官生長狀態(tài)，每隔 3 天更換一次培養(yǎng)基,。一般情況下,，5-8 天可觀察到人胰腺類器官生成，并進(jìn)行第一次傳代,。4. 類器官傳代a. 吸去上層培養(yǎng)基,，向孔中加入 500 μL 預(yù)冷人胰腺類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A，使用細(xì)胞刮刀或 1 mL 移液槍槍頭吹打從而將細(xì)胞培養(yǎng)孔內(nèi)容物剝離出培養(yǎng)板并轉(zhuǎn)移至 1.5 mL EP 管內(nèi),。b. 使用移液槍充分吹打混勻至類器官與基質(zhì)膠分離,，250-300 g 離心 3 分鐘收集沉淀。隨后加入 1 mL 人胰腺類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 重懸并輕柔地進(jìn)行充分吹打,，使類器官分散為碎片,。如類器官難以吹打成碎片可使用 5 倍體積的類器官消化液置于 37°C 培養(yǎng)箱中充分消化，一般不超過 3 分鐘,，隨后加入5 倍消化液體積的人胰腺類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 終止消化,。c. 在室溫下以 200-250 g 離心 3 分鐘。離心完畢,，棄上清,，用人胃上皮類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 或 PBS 清洗 1-2 次后備用。d. 在冰上將收集的細(xì)胞重懸于基質(zhì)膠中,，推薦重懸密度為每 50 μL 含有 50-200 個導(dǎo)管,。建議使用基質(zhì)膠原液重懸腫瘤細(xì)胞，如需稀釋,，請確?；|(zhì)膠體積與稀釋所用的類器官培養(yǎng)基體積的比例高于 2:1。e. 將混懸液迅速注入 24 孔細(xì)胞培養(yǎng)板的底部,，盡量避免產(chǎn)生氣泡，每孔注入 25-35 μL 混懸液,。隨后將細(xì)胞培養(yǎng)板放入 37°C,，5% CO2 的培養(yǎng)箱中孵育 15-25 分鐘進(jìn)行固化。f. 待基質(zhì)膠凝固后,，在每個孔邊緣緩慢注入 500 μL 預(yù)熱的人胰腺類器官培養(yǎng)基,，避免破壞已有的凝膠結(jié)構(gòu)，然后將細(xì)胞培養(yǎng)板放回 37°C,，5% CO2 的培養(yǎng)箱中,。g. 密切關(guān)注類器官的生長狀態(tài)，記錄多個視野中的胰腺類器官的形態(tài)和分布,。
注意事項(xiàng)：1. 配制后的培養(yǎng)基不建議在 4°C 冰箱中放置超過 2 周,。2. 提取原代組織細(xì)胞時需保持全程無菌,，避免造成后續(xù)實(shí)驗(yàn)污染。3. 類器官傳代消化時需時刻觀察碎片狀態(tài),，出現(xiàn)小細(xì)胞團(tuán)（10-50 個細(xì)胞）時應(yīng)終止消化,，避免時間過長影響類器官后續(xù)生長活力。4. 基質(zhì)膠操作需全程保持低溫避免凝膠,，與細(xì)胞重懸后應(yīng)將其迅速注入細(xì)胞培養(yǎng)孔內(nèi),，盡量避免產(chǎn)生氣泡。5. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,，不得用于臨床診斷或治療,，不得用于食品或藥品6. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作
銷售產(chǎn)品：D-(+)-Trehalose dihydrate | D-Glutamine | Neoeriocitrin | Netarsudil (dimesylate) | Edoxaban | JI-101 | (2S,3R,4S,5R)-2-Amino-3,4,5,6-tetrahydroxyhexanal hydrochloride | Dihydroergotoxine (mesylate) | Spaglumic Acid | Afzelin
Trending products：Recombinant Proteins | Bioactive Screening Libraries | Natural Products | Dye Reagents | PROTAC | Isotope-Labeled Compounds
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