慢病毒轉(zhuǎn)染試劑
MCE 國際站：Lentivirus Transfection Reagent
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件：20°C,，1 年避免反復凍融
簡介：MCE Lentivirus Transfection Reagent 是一種基于陽離子高分子聚合物的新型轉(zhuǎn)染試劑,，適用于慢病毒的包裝,、轉(zhuǎn)染，能顯著提高包裝,、轉(zhuǎn)染效率，并能產(chǎn)生更多的重組慢病毒,。
概述：慢病毒載體是以 HIV-1 為基礎(chǔ)的基因治療載體，能使外源基因穩(wěn)定整合至宿主細胞基因組中,，具有感染譜廣泛,、有效感染分裂期和靜止期細胞,、長期穩(wěn)定表達外源基因等優(yōu)點,，因此成為導入外源基因的有力工具,，廣泛應(yīng)用于各種細胞系的基因過表達,、RNA 干擾,、microRNA 研究及活體動物實驗等,。MCE Lentivirus Transfection Reagent 是一種基于陽離子高分子聚合物的新型轉(zhuǎn)染試劑,，適用于慢病毒的包裝,、轉(zhuǎn)染，能顯著提高包裝,、轉(zhuǎn)染效率,，并能產(chǎn)生更多的重組慢病毒。經(jīng)轉(zhuǎn)染包裝獲得的對照質(zhì)粒病毒滴度可達 108 TU/mL,，具有感染效率高、感染譜廣,、重復性高及操作簡便等優(yōu)點。
描述：
慢病毒載體是基于HIV-1的基因治療載體,，可將外源基因穩(wěn)定整合到宿主細胞基因組中，具有感染譜廣,、有效感染及分裂期長,、細胞靜止、外源基因長期穩(wěn)定表達等優(yōu)點,，已成為導入外源基因的有力工具,，廣泛應(yīng)用于各類細胞系基因過表達,、RNA干擾,、microRNA研究及動物體內(nèi)實驗等。
MCE慢病毒轉(zhuǎn)染試劑是一種基于陽離子聚合物的新型轉(zhuǎn)染試劑,，適用于慢病毒的包裝轉(zhuǎn)染,，顯著提高包裝轉(zhuǎn)染效率，從而產(chǎn)生更多的重組慢病毒,，轉(zhuǎn)染包裝得到的對照質(zhì)粒病毒滴度可達108 TU/mL,，具有感染效率高,、感染譜廣、重復性好,、操作簡便等優(yōu)點,。
操作說明：以 10 cm 細胞培養(yǎng)皿為例,，其它培養(yǎng)體系加樣體積參照表 1,。1.準備待轉(zhuǎn)染細胞轉(zhuǎn)染前一天,，將 4-6 × 106 個細胞 (293,、293T等) 接種至 10 cm 細胞培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，使其在包裝時密度為 70%-80%。注：為提高病毒包裝效率,，建議使用生長狀態(tài)良好且生長處于指數(shù)期,、存活率 > 90% 的細胞進行慢病毒包裝,。2.慢病毒包裝(1)取 4 μL 慢病毒包裝輔助質(zhì)?；旌衔镏?2 mL 離心管中，加入 4 μg 含有目的基因的慢病毒載體質(zhì)粒,，輕柔混勻,，加入 40 μL MCE Lentivirus Transfection Reagent 與質(zhì)粒混合,，室溫孵育 3 min,。(2)加入 1.8 mL 無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基，輕柔混勻,，室溫孵育 30 min,，即形成轉(zhuǎn)染試劑-核酸復合物。注：轉(zhuǎn)染試劑-核酸復核物在室溫下 4 h 內(nèi)保持穩(wěn)定,。(3)將轉(zhuǎn)染試劑-核酸復合物 (1.8 mL) 逐滴均勻加入細胞中,，輕柔混勻，置于 37°C 5% CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。注：注意在滴加時緩慢,，避免將細胞沖起，需輕柔混合均勻,。3.收獲病毒(1)轉(zhuǎn)染 24 h 后,，棄去初始病毒上清液，加入 10-15 mL 新鮮的培養(yǎng)基（含血清）,，置于 37°C 5% CO2 培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。(2)轉(zhuǎn)染 48 h 后，收集病毒上清液,，再加入 10-15 mL 新鮮的培養(yǎng)基（含血清）,，置于 37°C 5% CO2 培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。(3)轉(zhuǎn)染 72 h 后,，觀察細胞狀態(tài)并拍照,，并收集病毒上清液，與 48 h 收集的上清液混合,，800 × g 離心 10 min 以去除細胞碎片,，使用 0.45 μm 濾器過濾，過濾后的上清液可直接感染目的細胞，或?qū)ζ錆饪s以獲得更高滴度的慢病毒濃縮液,。注：凍融一次的病毒滴度將降低 10%-20%,，慢病毒建議分裝后保存于 -80°C，并于半年內(nèi)使用,，切忌反復凍融,。注：細胞轉(zhuǎn)染時，可根據(jù)實際情況參考上表進行等倍放大,。4.慢病毒滴度檢測分析使用梯度稀釋法感染細胞,，采用 PCR、qPCR 等方法測定病毒滴度
注意事項：1.轉(zhuǎn)染時,，建議選用無內(nèi)毒素,、純度高、無污染,、無菌的優(yōu)質(zhì)質(zhì)粒,。質(zhì)粒中的內(nèi)毒素會導致轉(zhuǎn)染效率顯著下降,，特別是內(nèi)毒素敏感的細胞（如原代細胞,、懸浮細胞、造血細胞等）,，推薦使用無內(nèi)毒素質(zhì)粒抽提試劑盒進行質(zhì)粒提取,，保證質(zhì)粒 A260/A280 比值在 1.8-2.0 之間,，濃度不低于 500 ng/μL,。2.需合理計算質(zhì)粒用量,，轉(zhuǎn)染過量的質(zhì)粒可能會導致細胞死亡,。3.細胞狀態(tài)會影響轉(zhuǎn)染效率，從而影響慢病毒質(zhì)量,，建議使用生長處于指數(shù)期、存活率大于 90% 的細胞進行慢病毒包裝,。避免細胞培養(yǎng)基有細菌、真菌或支原體的污染,，盡量使用傳代次數(shù)較少的細胞,，如果細胞是剛復蘇的話，最好傳兩代之后再包裝,。4.建議細胞傳代后 12-24 h 內(nèi),、細胞密度在 70%-80% 時進行慢病毒包裝,。在實驗過程中保證相同的接種條件，確保實驗數(shù)據(jù)的可重復性,。5.MCE Lentivirus Transfection Reagent 可用于含有血清培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)染,，并且轉(zhuǎn)染前后不需要更換培養(yǎng)基,。6.由于血清會影響-轉(zhuǎn)染試劑復合物的形成，因此在準備轉(zhuǎn)染復合物時需用無血清培養(yǎng)基稀釋 DNA 及轉(zhuǎn)染試劑,。7.所有慢病毒操作均需在 BSL2 級生物安全柜中進行,，慢病毒轉(zhuǎn)染操作中涉及的槍頭,、培養(yǎng)基等廢棄物,，必須處理后才能丟棄,。8.本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療,，不得用于食品或藥品,。為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作
銷售產(chǎn)品：Cetirizine (dihydrochloride) | Rutin (hydrate) | Enfuvirtide | A 1120 | Anhydroleucovorin | Vedolizumab (anti-α4β7-integrin) | Paltusotine | Polymyxin B | Histone H2A.X Antibody | Mosapride (citrate)
Trending products：Recombinant Proteins | Bioactive Screening Libraries | Natural Products | Dye Reagents | PROTAC | Isotope-Labeled Compounds
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