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PEI 轉(zhuǎn)染試劑

MCE 國際站：PEI Transfection Reagent

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲條件： -20°C，12個月避免反復(fù)凍融

簡介：MCE PEI 轉(zhuǎn)染試劑是一款基于 25 kDa PEI 改造的 DNA 轉(zhuǎn)染試劑,?？蓮V泛應(yīng)用于多種細(xì)胞系的 DNA 轉(zhuǎn)染，包括 HEK-293,、HEK-293T,、CHO-K1、COS-1,、COS-7,、NIH/3T3,、Sf9、HepG2 和 HeLa 細(xì)胞等,，也可應(yīng)用于大規(guī)模重組蛋白表達(dá)和病毒生產(chǎn)等領(lǐng)域,。

概述：PEI 是基因轉(zhuǎn)染中常用的高分子載體。PEI 是一種帶正電荷的陽離子聚合物,，極易與帶負(fù)電的核酸分子結(jié)合形成復(fù)合物,，該復(fù)合物再與細(xì)胞表面帶負(fù)電荷的蛋白多糖相互作用，通過胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞,。MCE PEI Transfection Reagent 是一種基于分子量 25 kDa PEI 的 DNA 轉(zhuǎn)染試劑,，通過引入可特異性結(jié)合 DNA 的功能基因?qū)?PEI 進(jìn)行改性，顯著增強(qiáng)了 PEI 和 DNA 的結(jié)合能力,，并且降低了細(xì)胞毒性。另外,，通過功能性優(yōu)化顯著增強(qiáng)了 PEI 的細(xì)胞攝取,、內(nèi)涵體逃逸等功能。MCE PEI Transfection Reagent 具有細(xì)胞毒性小,、轉(zhuǎn)染效率高,、穩(wěn)定性強(qiáng)及操作簡便等優(yōu)點(diǎn)，在多種細(xì)胞系中都能實(shí)現(xiàn)高效,、低毒的 DNA 轉(zhuǎn)染,，包括 HEK-293、HEK-293T,、CHO-K1,、COS-1、COS-7,、NIH/3T3,、Sf9、HepG2 和 HeLa 等細(xì)胞,。高性價比使其可廣泛用于大規(guī)模重組蛋白表達(dá)和病毒生產(chǎn)等工業(yè)領(lǐng)域,。

描述：

聚乙烯亞胺是基因轉(zhuǎn)染中常用的聚合物載體，由陽離子聚合物組成,，可將核酸導(dǎo)入真核細(xì)胞,。在聚合物轉(zhuǎn)染中，外源DNA與陽離子聚合物形成復(fù)合物,，通過內(nèi)吞作用進(jìn)入宿主細(xì)胞,。

MCE PEI轉(zhuǎn)染試劑是在25kDa PEI的基礎(chǔ)上設(shè)計而成，通過引入功能基因進(jìn)行修飾,，增強(qiáng)DNA的結(jié)合能力,，降低細(xì)胞毒性,，同時修飾后的PEI的細(xì)胞攝取和內(nèi)體逃逸功能明顯增強(qiáng)。

MCE PEI轉(zhuǎn)染試劑高效,、低毒,、穩(wěn)定性強(qiáng)，適用于HEK-293,、HEK-293T,、CHO-K1、COS-1,、COS-7,、NIH/3T3、Sf9,、HepG2和HeLa等多種細(xì)胞,，甚至適用于一些難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。還可應(yīng)用于大規(guī)模重組蛋白表達(dá)和病毒生產(chǎn),。

操作說明：1. 準(zhǔn)備待轉(zhuǎn)染細(xì)胞1.1 貼壁細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天,，將胰酶消化后的細(xì)胞進(jìn)行鋪板 (0.3-2 × 105 個細(xì)胞/孔)，至細(xì)胞密度達(dá)到 60-70% 進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染1.2 懸浮細(xì)胞：轉(zhuǎn)染當(dāng)天,，配制轉(zhuǎn)染試劑-DNA 復(fù)合物之前,，先進(jìn)行細(xì)胞鋪板，每 500 μL 生長培養(yǎng)基中加入 2-5 × 105 個細(xì)胞,。注：為提高轉(zhuǎn)染效率,，建議使用生長狀態(tài)良好且生長處于指數(shù)期、存活率 >90% 的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染,。2. 準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物2.1 取 1 μg 質(zhì)粒 DNA 至 1.5 mL EP 管中,，加入 50 μL 無血清培養(yǎng)基（與培養(yǎng)體系一致，無血清無雙抗）,，輕柔混勻,。2.2 取 2.5 μL PEI Transfection Reagent 轉(zhuǎn)染試劑加入到另一個 1.5 mL EP 管中，加入 50 μL 無血清培養(yǎng)基（與培養(yǎng)體系一致,，無血清無雙抗）輕柔混勻,。注：a) 通常情況下，DNA (μg) 和 PEI Transfection Reagent (μL) 的用量比例為 1:2.5,。為提高轉(zhuǎn)染效果,，可在 1:1-1:5 范圍內(nèi)調(diào)整以優(yōu)化轉(zhuǎn)染效果。b) 最佳轉(zhuǎn)染條件因細(xì)胞類型和培養(yǎng)條件不同而有所區(qū)別,，可做預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索最佳轉(zhuǎn)染比例,。2.3 將 2.1 轉(zhuǎn)移至 2.2 中，輕柔混勻（總體積為 100 μL），室溫孵育 30 min,，即形成轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物,。注：該轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物在室溫下 4 h 內(nèi)仍保持穩(wěn)定。注： 細(xì)胞轉(zhuǎn)染時,，可根據(jù)實(shí)際情況參考上表進(jìn)行等倍放大,。3. 細(xì)胞轉(zhuǎn)染將上述轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物 (100 μL) 加入每孔細(xì)胞，輕柔混勻,，將細(xì)胞放回培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。4. 分析轉(zhuǎn)染細(xì)胞轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng) 36-48 h 后，可使用熒光檢測法,、Western Blot,、ELISA、RT-PCR,、流式細(xì)胞術(shù),、報告基因等檢測轉(zhuǎn)染效果，或加入篩選藥物進(jìn)行穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選,。

注意事項：1. 轉(zhuǎn)染時,，建議選用高純度、無菌,、無污染、無內(nèi)毒素的優(yōu)質(zhì)的質(zhì)粒 DNA,。質(zhì)粒中內(nèi)毒素會導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率顯著下降,，推薦配合選用 MCE 質(zhì)粒大量抽提試劑盒 ，提取質(zhì)粒純度更高,，柱上去除內(nèi)毒素,，操作簡便。2. 細(xì)胞狀態(tài)會極大影響轉(zhuǎn)染效率,，為提高轉(zhuǎn)染效率,，建議使用生長狀態(tài)良好且生長處于指數(shù)期、存活率 >90% 的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染,。3. 轉(zhuǎn)染過程中,，抗生素的存在可能導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低及細(xì)胞毒性，不建議在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中添加抗生素,。4. 影響轉(zhuǎn)染效率的因素有很多,，如細(xì)胞類型、細(xì)胞狀態(tài)及密度,、核酸質(zhì)量及濃度,、轉(zhuǎn)染試劑與核酸比例等，建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索最佳轉(zhuǎn)染條件,。5. 血清會對轉(zhuǎn)染效果產(chǎn)生一定程度的干擾,，為提高轉(zhuǎn)染效率,，轉(zhuǎn)染過程中，建議使用無血清培養(yǎng)基,。6. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品,。7. 為了您的安全和健康,，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

銷售產(chǎn)品：Guanosine  | Narirutin  | Chrysophanol  | Ulinastatin  | Zaprinast  | Pipecolic acid  | ML-9  | Tiotropium (Bromide)  | Spesolimab  | 5-Aminolevulinic acid-13C-1 (hydrochloride)

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