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一步法 TUNEL 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 | MedChemExpress (MCE)

閱讀:55      發(fā)布時(shí)間:2024-9-11
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一步法 TUNEL 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(綠色熒光)

MCE 國際站:One Step TUNEL Apoptosis Detection Kit (FITC)

品牌:MedChemExpress (MCE)

存儲(chǔ)條件: -20℃ 保存一年避光保存

簡介:MCE 一步法 TUNEL 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒采用一步染色的方法快速檢測(cè)細(xì)胞凋亡,。染色后,,正常細(xì)胞基本無熒光,凋亡細(xì)胞呈綠色熒光,。

概述:MCE一步法 TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒采用一步染色的方法快速檢測(cè)細(xì)胞凋亡,。細(xì)胞凋亡時(shí),相關(guān)DNA 內(nèi)切酶被激活,進(jìn)而切斷核小體間的基因組DNA,產(chǎn)生 180-200 bp 的 DNA ladder,其暴露的3'-OH 經(jīng)末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)催化后可加上綠色熒光探針 FITC 標(biāo)記的 dUTP,借助熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀即可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。FITC最大激發(fā)波長為488 nm,最大發(fā)射波長為525 nm,凋亡細(xì)胞顯示綠色熒光,正常細(xì)胞無熒光,。

描述:

MCE一步法TUNEL凋亡檢測(cè)試劑盒(FITC)為檢測(cè)細(xì)胞凋亡提供了一種快速,、方便的方法。細(xì)胞凋亡時(shí),,特異性的DNA內(nèi)切酶會(huì)被激活,,將基因組DNA在核小體之間切割。凋亡細(xì)胞的DNA被切割成180-200bp片段的多聚體,。斷裂的DNA暴露的3'-OH可在熒光素標(biāo)記的dUTP的末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)的催化下發(fā)生反應(yīng),,可用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。FITC的最大激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為488nm和525nm,。


操作說明:樣品準(zhǔn)備1.1貼壁細(xì)胞:a.洗滌:棄去培養(yǎng)基,加入PBS 洗滌2次,每次5分鐘,。b.固定:加入固定液4℃固定30分鐘。c.洗滌:加入 PBS 洗滌 2次,每次5分鐘,。輕輕棄去 PBS,并用濾紙吸去多余的液體,。d.通透:加入通透液室溫孵育5分鐘。e.洗滌:加入 PBS 洗滌 2 次,每次5分鐘,。輕輕棄去PBS,并用濾紙吸去多余的液體,。1.2懸浮細(xì)胞:a.洗滌:離心收集細(xì)胞(不超過2X106個(gè)細(xì)胞),加入PBS 洗滌2次,每次5分鐘。b.固定:加入固定液4℃固定30分鐘,。注:建議置于搖床上固定,以防止細(xì)胞聚團(tuán),。c.洗滌:加入 PBS 洗滌2次,每次5分鐘。輕輕棄去PBS,并用濾紙吸去多余的液體,。d.通透:加入通透液室溫孵育5分鐘,。e.洗滌:加入 PBS 洗滌2次,每次5分鐘。輕輕棄去PBS,并用濾紙吸去多余的液體,。1.3 石蠟切片:a.脫蠟:室溫下將石蠟切片置于二甲苯中脫蠟5-10分鐘,重復(fù)兩次,。b.水化:用無水乙醇浸泡5分鐘,重復(fù)兩次。隨后用梯度乙醇(90%,、80%,、70%)依次浸泡2分鐘。c.洗滌:加入PBS 洗滌2次,每次5分鐘。輕輕棄去PBS,并用濾紙吸去多余的液體,。d.通透:加入適量蛋白酶K溶液,室溫孵育 15-30分鐘,。注:需自行優(yōu)化蛋白酶K溶液孵育的溫度和時(shí)間。e.洗滌:加入 PBS 洗滌2次,每次5分鐘,除盡蛋白酶K,并用濾紙吸去多余的液體,。1.4 冰凍切片a.固定:將冰凍切片回溫至室溫,。加入固定液4℃ 固定30-60分鐘。b.洗滌:加入 PBS 洗滌2次,每次10分鐘,。輕輕棄去 PBS,并用濾紙吸去多余的液體。C.通透:加入通透液室溫孵育5分鐘,。d.洗滌:加入 PBS 洗滌2次,每次10分鐘,。輕輕棄去 PBS,并用濾紙吸去多余的液體。注:所有處理好的樣本建議置于濕盒中保持濕潤,切勿讓樣品干燥,。配制 TUNEL 工作液注:配制好的 TUNEL 工作液禁止冷凍保存,。標(biāo)記與檢測(cè)對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片:加入50μL TUNEL工作液,37℃避光孵育60分鐘。加入PBS 洗滌3次,。加入抗熒光淬滅封片液(HY-K1042)封片后在熒光顯微鏡下觀察熒光效果,。注:a.注意避免 TUNEL 工作液的蒸發(fā)。b.對(duì)于6孔板的每個(gè)孔,宜加入100μL TUNEL 工作液,。c.若 TUNEL 反應(yīng)過強(qiáng),可用 TdT Dilution Buffer 將TdT Enzyme稀釋2-5 倍后再進(jìn)行操作,。對(duì)于懸浮細(xì)胞:加入50μL TUNEL工作液,37C避光孵育60 分鐘。加入PBS 洗滌3次,。加入250-500 μL PBS 充分懸浮細(xì)胞,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)或涂片后在熒光顯微鏡下觀察熒光效果,。注:若 TUNEL 反應(yīng)過強(qiáng),可用 TdT Dilution Buffer 將TdT Enzyme 稀釋2-5 倍后再進(jìn)行操作

注意事項(xiàng):1.樣品通透前可用石蠟筆在樣品周圍描繪樣品輪廓,以便于后續(xù)通透處理。2.所有處理好的樣本建議置于濕盒中保持濕潤,切勿讓樣品干燥,。3.固定懸浮細(xì)胞時(shí),為防止細(xì)胞聚集成團(tuán),建議置于搖床中進(jìn)行固定,。4.配制 TUNEL 工作液時(shí)需充分混勻,現(xiàn)用現(xiàn)配,注意避光,禁止冷凍保存。5.熒光染料都存在淬滅的問題,染色后應(yīng)盡快檢測(cè)熒光強(qiáng)度,且整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程盡量避光下進(jìn)行,。6.若 TUNEL 反應(yīng)過強(qiáng),可用 TdT Dilution Buffer 將TdT Enzyme 稀釋 2-5倍后再進(jìn)行操作,。7.本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品。8.為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。

銷售產(chǎn)品:Caspase-3 Antibody  | Kansuinine A  | Riociguat  | Rotundic acid  | Yohimbine  | Mannan  | Catechol O-methyltransferase  | Amaroswerin  | Itepekimab  | trans-Permethrin

Trending products:Recombinant Proteins  |  Bioactive Screening Libraries  |  Natural Products  |  Dye Reagents  |  PROTAC  |  Isotope-Labeled Compounds


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