Annexin V-mCherry/SYTOX Green 細胞凋亡檢測試劑盒
MCE 國際站：Annexin V-mCherry/SYTOX Green Apoptosis Detection Kit
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件： -20℃ 保存一年。避光保存,，避免反復(fù)凍融,。
簡介：Annexin V-mCherry/SYTOX Green 細胞凋亡檢測試劑盒可方便、快捷的檢測細胞凋亡,。經(jīng) Annexin V-mCherry 和 SYTOX Green 聯(lián)合染色后,，正常細胞基本無熒光，凋亡細胞呈紅色熒光,，壞死細胞呈紅色和綠色熒光,。
概述：MCE Annexin V-mCherry/SYTOX Green 細胞凋亡檢測試劑盒采用 mCherry 標記的重組人 Annexin V 檢測細胞凋亡。在正常細胞中,，磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine, PS）位于細胞膜內(nèi)側(cè),；細胞凋亡早期，PS 會外翻到細胞膜外側(cè),。Annexin V（膜聯(lián)蛋白 V）是一種 Ca 依賴性磷脂結(jié)合蛋白,，可與 PS 特異性結(jié)合，因此 Annexin V 常作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。Annexin V 經(jīng) mCherry 標記后可發(fā)紅色熒光,，利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發(fā)生,。此外，本試劑盒中的SYTOX Green 是一種非細胞膜滲透性的綠色熒光染料,，只能對死細胞染色,。經(jīng) Annexin V-mCherry 和 SYTOX Green 聯(lián)合染色后，正常細胞基本無熒光,，凋亡細胞呈紅色熒光,，壞死細胞呈紅色和綠色熒光。
描述：
Annexin V-mCherry/SYTOX Green 凋亡檢測試劑盒提供了一種快速,、方便的檢測細胞凋亡和壞死的方法,。在正?；罴毎?，磷脂酰絲氨酸 (PS) 位于細胞膜的細胞質(zhì)表面。在細胞凋亡開始時,，PS 從膜的內(nèi)小葉轉(zhuǎn)移到外小葉,。Annexin V 是一種 35-36 kDa Ca2+ 依賴性磷脂結(jié)合蛋白，對 PS 具有高親和力,。用 mCherry 標記的 Annexin V 可以通過與外小葉上暴露的 PS 結(jié)合來識別凋亡細胞,。SYTOX Green 是一種出色的綠色熒光核和染色體復(fù)染劑，僅適用于死細胞,。用 Annexin V-mCherry 和 SYTOX Green 染色細胞后,，活細胞幾乎不顯示熒光，凋亡細胞顯示紅色熒光,，壞死細胞顯示紅色和綠色熒光,。
操作說明：1. 收集細胞：收集 1-5 × 10 個細胞。懸浮細胞：1000 g 離心 5 min,，棄去上清,。加入 1 mL 預(yù)冷的 PBS 輕輕重懸細胞沉淀，1000 g 離心 5 min,，棄去上清,，保留細胞沉淀。貼壁細胞：小心吸取細胞培養(yǎng)液保存?zhèn)溆?。加?PBS 洗滌后,，加入適量胰酶消化液（盡量不含 EDTA，以免影響 Annexin V 和 PS 的結(jié)合）消化細胞,。加入前面收集的培養(yǎng)液,，輕輕吹打細胞，制成單細胞懸液，1000 g 離心 5 min,，棄去上清,。加入 1 mL 預(yù)冷的 PBS 輕輕重懸細胞沉淀，1000 g 離心 5 min,，棄去上清,，保留細胞沉淀。2. 加入 195 μL Binding Buffer,，輕輕重懸細胞,。3. 加入 5 μL Annexin V- mCherry，輕輕混勻,。4. 加入 1 μL SYTOX Green,，輕輕混勻。5. 室溫下避光孵育 10-20 min,。注：孵育過程中可輕輕顛倒數(shù)次以加強染色效果,。6. 檢測與分析a. 流式細胞儀檢測：用流式細胞儀檢測熒光強度注：流式檢測時，mCherry 最大激發(fā)波長為 587 nm,，最大發(fā)射波長為 610 nm,；SYTOX Green-DNA 最大激發(fā)波長為 504 nm，最大發(fā)射波長為 523 nmb.建議設(shè)置三組對照：未染色組,、 SYTOX Green 單染組及 Annexin V-mCherry 單染組,。 熒光顯微鏡檢測：1000 g 離心 5 min，棄去上清,，加入 50-100 μL Binding Buffer 輕輕重懸細胞沉淀,，涂片后用熒光顯微鏡檢測熒光強度。
注意事項：1. 熒光染料都存在淬滅的問題,，染色后應(yīng)盡快檢測熒光強度,，且整個實驗過程盡量避光下進行。2. 若使用胰酶處理貼壁細胞,，應(yīng)盡可能地去除胰酶,，防止 Annexin V- mCherry 降解從而導(dǎo)致染色失敗。3. Annexin V- mCherry 和 SYTOX Green 均對人體有害,，操作時務(wù)必小心,。4. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療,，不得用于食品或藥品,。5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作,。
銷售產(chǎn)品：L-Cycloserine | Exemestane | Osthole | Cephalosporin C zinc salt | Acriflavine | Aurantio-obtusin | Glycol chitosan | Azumolene | Tylosin | Dihydroergocristine (mesylate)
Trending products：Recombinant Proteins | Bioactive Screening Libraries | Natural Products | Dye Reagents | PROTAC | Isotope-Labeled Compounds
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