NP-40 裂解液
MCE 國際站：NP-40 Lysis Buffer
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件： -20oC,，1 年
簡介：MCE NP-40 Lysis Buffer 是一種比較溫和的細胞/組織裂解液，可用于動物,、植物的細胞或組織及真菌,、細菌樣品，經(jīng)裂解得到的蛋白樣品可用于 PAGE,、Western,、IP、co-IP 和 ELISA 等實驗,。
概述：NP-40 Lysis Buffer 是一種比較溫和的細胞/組織裂解液,，可用于動物、植物的細胞或組織及真菌,、細菌樣品,，經(jīng)裂解得到的蛋白樣品可用于 PAGE、WB,、IP,、Co-IP 和 ELISA 等相關(guān)實驗。溫和的裂解方法有利于維持原有的蛋白結(jié)構(gòu)及蛋白間的相互作用,。本產(chǎn)品的主要成分為 50 mM Tris (pH 7.4),、150 mM NaCl、1% NP-40 及 sodium pyrophosphate,、β-glycerophosphate,、sodium orthovanadate、sodium fluoride,、EDTA,、leupeptin 等，可有效防止蛋白降解,。
描述：
MCE NP-40裂解液是一種比較溫和的裂解液,，可用于動植物細胞或組織，也可用于真菌,、細菌樣品,，裂解得到的蛋白樣品可用于PAGE、WB,、IP、Co-IP,、ELISA等實驗等,，溫和的裂解有利于保持蛋白原有的結(jié)構(gòu)和原有的蛋白間相互作用。
NP-40裂解液含有50 mM Tris（pH 7.4）、150 mM NaCl,、1% NP-40以及多種抑制劑如焦磷酸鈉,、β-甘油磷酸鹽、釩酸鈉,、氟化鈉,、EDTA和亮抑酶肽等，能有效抑制蛋白降解,。
操作說明：使用前需將本產(chǎn)品在室溫下充分融解并混勻,，置于冰上備用。取適當量的裂解液,，如有需要,，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入蛋白酶/磷酸酶/蛋白激酶等相關(guān)抑制劑 Cocktail (相關(guān)產(chǎn)品見附件清單)，具體操作可參考相關(guān)產(chǎn)品說明書,。1. 對于細胞樣品貼壁細胞1) 去除培養(yǎng)液,，用預冷的 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液清洗 1 次 (洗去血清中 IgG 干擾對 IP 和 Co-IP 實驗是有益的,，但對 WB 可能并非必要,；若血清中的蛋白沒有干擾，可不清洗),。2) 按照 6 孔板每孔加入 150-250 μL 裂解液的比例加入預冷的 NP-40 Lysis Buffer,，用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細胞充分接觸,。注：通常裂解液接觸動物細胞 1-2 s 后,，細胞就會被裂解。植物細胞宜在冰上裂解 2-10 min,。3) 充分裂解后,，10,000-14,000 g 離心 3-5 min，取上清,，即可進行后續(xù)的 PAGE,、WB 和 IP、Co-IP 等相關(guān)實驗,。懸浮細胞1) 離心收集細胞,，500 g，5 min,，棄上清 (也可用預冷的 PBS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗 1 遍后再進行離心，棄上清),。輕輕渦旋或輕彈管底使細胞盡量分散開,。2) 按照 6 孔板每孔加入 150-250 μL 裂解液的比例加入預冷的 NP-40 Lysis Buffer,，輕彈管底以充分裂解細胞，此時應無明顯的細胞沉淀,。注：若細胞量較多,，建議將樣品分裝后裂解 (0.5-5 × 106 cells/管)。3) 充分裂解后,，10,000-14,000 g 離心 3-5 min,，取上清，即可進行后續(xù)的 PAGE,、WB 和 IP,、Co-IP 等相關(guān)實驗。細菌或酵母細胞為達到更好的裂解效果,，細菌和酵母可先分別使用溶菌酶和破壁酶進行消化,，然后再使用 NP-40 Lysis Buffer 進行裂解。1) 取 1 mL 菌液或酵母液,，離心去上清 (也可用預冷的 PBS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗 1 遍后再進行離心，棄上清),。輕輕渦旋或輕彈管底以把細菌或酵母細胞盡量分散開,。2) 加入 100-200 μL NP-40 Lysis Buffer，輕彈管底以充分裂解細胞,，冰上裂解 2-10 min,。3) 充分裂解后，10,000-14,000 g 離心 3-5 min,，取上清,，即可進行后續(xù)的 PAGE、WB 和 IP,、Co-IP 等相關(guān)實驗,。2. 對于組織樣品1) 將組織置于小皿中，冰上操作,，剪切成細小的碎片,。注：也可將組織樣品冷凍后使用液氮充分研磨后再加入 NP-40 Lysis Buffer 進行裂解。2) 按照每 20 mg 組織加入 150-250 μL 裂解液的比例加入預冷的 NP-40 Lysis Buffer,。若裂解不充分可適當增加裂解液的用量,；若需高濃度的蛋白樣品，可適當減少裂解液的用量3) 使用玻璃勻漿器勻漿,。4) 充分裂解后,，10,000-14,000 g 離心 3-5 min，取上清,，即可進行后續(xù)的 PAGE,、WB 和 IP,、Co-IP 等實驗。注：a) 蛋白濃度因不同狀態(tài)的不同組織會有所不同,。本實驗中，每 20 mg 凍存的小鼠肝臟組織用 200 μL NP-40 Lysis Buffer 裂解后獲得的上清,，其蛋白濃度約為 15-25 mg/mL,。b) 若組織樣品本身體積較小，可適當剪切后直接加入 NP-40 Lysis Buffer 進行裂解,，經(jīng)短暫渦旋后使樣品充分裂解,，離心取上清，用于后續(xù)實驗,。
注意事項：1. 本產(chǎn)品盡量避免反復凍融,，可適當分裝后凍存使用。2 . 裂解樣品的所有步驟都需在冰上或 4oC 進行,。3 . 該試劑盒中不包含蛋白酶/磷酸酶/蛋白激酶等相關(guān)抑制劑 Cocktail,。4. 裂解液用量說明：不同細胞的裂解液用量不同。通常 6 孔板每孔細胞或 1 mL 菌液/酵母液加入 150 μL 裂解液即可,。若細胞密度較高,，可適當增加裂解液用量至 200-250 μL。通常,，每 1 × 106 個動物細胞用 100 μL NP-40 Lysis Buffer 裂解后獲得的上清,，其蛋白濃度約為 2-4 mg/mL。5. 關(guān)于裂解液的選擇,，建議通過預實驗以摸索最佳裂解條件并裂解產(chǎn)品,。如：對于一些特殊蛋白的 IP，若 WB 及 IP 中細胞裂解液裂解效果不太理想,，可嘗試使用 RIPA 裂解液 (強,、中或弱) 或 NP-40 Lysis Buffer。若 IP 的背景很高,，即非特異的蛋白也被 IP 下來,，或?qū)τ谝恍┹^難溶解蛋白的 WB，則需選用裂解強度較高的裂解液,，如 RIPA 裂解液 (強),。若目的蛋白未被 IP 下來，則可能是裂解強度過強,，可使用較為溫和的裂解液如 MCE NP-40 Lysis Buffer,。6. 本產(chǎn)品含有較高濃度的去垢劑，后續(xù)蛋白濃度測定不宜用 Bradford 法,，建議使用 BCA 法進行測定,。7. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品,。8. 為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
銷售產(chǎn)品：Rilmazafone hydrochloride | Aristolochic acid A | 116-9e | 5-Methyltetrahydrofolic acid | NMS-873 | Isatuximab | BLU9931 | Saikosaponin A | Cilastatin | BRD0705
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