Anti-RFP 親和凝膠
MCE 國(guó)際站：Anti-RFP Affinity Gel
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲(chǔ)條件：4℃,，2 年禁止凍結(jié)
簡(jiǎn)介：MCE Anti-RFP 親和凝膠可用于檢測(cè)和純化天然 RFP、RFP 突變體及其融合蛋白,，也可用于免疫沉淀 (IP) 實(shí)驗(yàn),。
概述：紅色熒光蛋白 (Red Fluorecent Protein，RFP) 是從?？蟹蛛x出的一種熒光蛋白,。紅色熒光具有較強(qiáng)的組織穿透力，將其作為報(bào)告基因已廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)領(lǐng)域,。MCE Anti-RFP 親和凝膠由高品質(zhì)的 RFP 抗體與瓊脂糖共價(jià)偶聯(lián)制成,，具有高載量、高特異性和性質(zhì)穩(wěn)定等特點(diǎn),，可用于檢測(cè)和純化天然 RFP,、RFP 突變體及其融合蛋白，也可用于免疫共沉淀 (Co-IP) 實(shí)驗(yàn),。本產(chǎn)品每 1 mL 總體積中 0.5 mL 為凝膠,。使用前，需將凝膠充分重懸混勻后吸取,。
描述：
紅色熒光蛋白（RFP）來(lái)源于 Discoso-masp,。其紅色熒光具有很強(qiáng)的穿透力，特別適用于成像和細(xì)胞追蹤研究,。RFP 已廣泛用作細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)領(lǐng)域的報(bào)告基因,。
MCE 抗 RFP 親和凝膠是通過(guò)將高品質(zhì) RFP 抗體與瓊脂糖共價(jià)偶聯(lián)而產(chǎn)生的。它具有高負(fù)載能力,、高效的的特異性和穩(wěn)定性,。該凝膠可用于檢測(cè)和純化天然 RFP、RFP 突變體及其融合表達(dá)蛋白,。此外,，它還可用于免疫沉淀 (IP) 測(cè)定。
該產(chǎn)品每 1 mL 總體積含有 0.5 mL 凝膠,。使用前,，請(qǐng)確保在抽吸前將凝膠重新懸浮并混合,。
操作說(shuō)明：蛋白純化樣品在上樣前建議離心或用 0.22 μm 或 0.45 μm 濾膜過(guò)濾，減少雜質(zhì),，提高蛋白純化效率,。1. 中壓層析柱法1) 裝柱：將 Anti-RFP 親和凝膠裝入合適的層析柱中，連接層析柱與色譜系統(tǒng),。2) 柱平衡：用 5 倍柱體積的結(jié)合緩沖液清洗進(jìn)行柱平衡,。重復(fù) 2-3 次。3) 上樣：利用泵或樣品環(huán)上樣,，收集流出液,，可以反復(fù)上樣提高結(jié)合效率。注：a. 請(qǐng)根據(jù)蛋白量選擇合適凝膠量,，上樣量避免超過(guò)柱子的結(jié)合能力； b. 樣品粘度或體積增加可能會(huì)造成層析柱反壓,。4) 洗雜：使用 10-20 倍柱體積的洗滌緩沖液沖洗柱子,，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜流出液,，直至紫外吸收基線趨于平衡,。5) 洗脫：使用 3-5 倍柱體積的洗脫緩沖液進(jìn)行洗脫，分管收集并立即用中和液緩沖液中和 pH （總洗脫液體積的 1/10）,，樣品可用于后期功能分析,。注：洗脫后蛋白短期可 4℃ 存放，若要長(zhǎng)期存放建議置于 -20℃ 中,。6) 再生：使用 5 倍柱體積洗脫緩沖液洗脫層析柱再生填料,，再用洗滌緩沖液平衡層析柱至中性。注：酸性洗脫后填料要立即用結(jié)合緩沖液平衡,，Anti-RFP 親和凝膠在洗脫液中不要超過(guò) 20 min,。7) 保存：使用 5-10 倍柱體積凝膠儲(chǔ)存緩沖液平衡層析柱，卸下層析柱,，置于 2-8℃保存,。2. 重力柱法1) 裝柱：依照所需純化的樣品量，取適量 Anti- RFP 親和凝膠混懸液加入重力層析柱中,，去除保護(hù)液,。2) 柱平衡：使用 5 倍柱體積的結(jié)合緩沖液對(duì)已裝填好的重力層析柱進(jìn)行柱平衡。重復(fù) 2-3 次,。3) 上樣：樣品加入后至少保留 5 min,，以保證樣品與介質(zhì)充分接觸，收集流出液,。注：反復(fù)上樣可提高結(jié)合效率,。4) 洗雜：使用 10-15 倍柱體積的洗滌緩沖液進(jìn)行洗雜，以去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜流出液,。5) 洗脫：使用 3-5 倍柱體積的洗脫緩沖液進(jìn)行洗脫,，分管收集并立即用中和液緩沖液中和 pH （總洗脫液體積的 1/10），樣品可用于后期功能分析,。注：洗脫后蛋白短期可 4℃ 存放,，若要長(zhǎng)期存放建議置于 -20℃ 中。6) 再生：使用 5-10 倍柱體積洗脫緩沖液 Ⅰ 或 洗脫緩沖液 Ⅱ 洗脫層析柱再生填料,，再用洗滌緩沖液平衡層析柱至中性,。注：酸性洗脫后填料要立即用結(jié)合緩沖液平衡，Anti-RFP 親和凝膠在洗脫液中不要超過(guò) 20 min,。7) 保存：使用 5 倍柱體積凝膠儲(chǔ)存緩沖液平衡層析柱,，置于 2-8℃保存。3. 離心法1) 填料預(yù)處理：依照所需純化的樣品量,，取適量 Anti- RFP 親和凝膠混懸液加入離心管中,，5,000 g 離心 1 min，棄上清,。加入 5 倍凝膠體積的結(jié)合緩沖液清洗,，5,000 g 離心 1 min，棄上清,，重復(fù) 2-3 次,。2) 結(jié)合：加入樣品，封閉離心管,，4°C 孵育 2-4 h (或 37°C 孵育 0.5-2 h),。3) 洗滌：孵育完成后，5,000 g 離心 1 min,，棄上清 (上清可保留作為流穿液,，用于電泳鑒定)。使用 5 倍凝膠體積的洗滌緩沖液清洗,，5,000 g 離心 1 min,，棄上清，重復(fù) 3-5 次,。4) 洗脫：使用 3-5 倍柱體積的洗脫緩沖液進(jìn)行洗脫,，室溫孵育 5-10 min，5,000 g 離心 1 min,，分管收集并立即用中和液緩沖液中和 pH （總洗脫液體積的 1/10）,，樣品可用于后期功能分析?？芍貜?fù) 2-3 次并分別收集上清液,。注：a. 酸性洗脫后填料要立即用結(jié)合緩沖液平衡,，Anti-RFP 親和凝膠在洗脫液中不要超過(guò) 20 min。b. 洗脫后蛋白短期可 4℃ 存放,，若要長(zhǎng)期存放建議置于 -20℃ 中,。5) 再生及保存：使用 5-10 倍凝膠體積的洗滌緩沖液沖洗介質(zhì)，再用 5-10 倍凝膠體積的 ddH2O 沖洗,，最后使用 2 倍凝膠體積的凝膠儲(chǔ)存緩沖液沖洗,，置于 2-8°C 保存。免疫共沉淀 IP1. 凝膠預(yù)處理1) 將 Anti-RFP 親和凝膠重懸混勻,，吸取 40 μL 凝膠懸液（約 20 μL 凝膠）至干凈的 1.5 mL 離心管中,，5,000 g 離心 1 min，棄上清,。2) 加入 500 μL 結(jié)合緩沖液,，混合均勻，5,000 g 離心 1 min,，棄上清,。重復(fù) 2-3 次。2. 樣品結(jié)合1) 在上述清洗干凈的凝膠中加入 200-1,000 μL 樣品,。充分混勻后，置于翻轉(zhuǎn)混合儀上孵育,，4℃ 孵育 2 h,。如需提高結(jié)合效率，可過(guò)夜孵育,。注：對(duì)于易降解的蛋白,，建議添加蛋白酶抑制劑。2) 5,000 g離心 1 min,，將上清轉(zhuǎn)移至新離心管 (上清液可用于檢測(cè) RFP 標(biāo)簽蛋白是否有殘留),。3. 洗滌在上述分離得到的凝膠中加入 500 μL 洗滌緩沖液，充分混懸凝膠,，5,000 g m 離心 1 min,，棄去上清。重復(fù)以上洗滌步驟 3 次以上,，直到洗滌后的上清液中 OD280 小于 0.05 為止,。注：多次洗滌的目的是確保去除非特異性吸附，如上清液的 OD280 大于 0.05,，可增加洗滌次數(shù),。4. 洗脫提供兩種洗脫方案，可根據(jù)需要選擇不同的洗脫方案,。1) 酸性洗脫法：此方法洗脫的樣品保持原有生物活性,，可用于后期功能分析,。在上述洗滌干凈的凝膠中加入 50-100 μL 洗脫緩沖液，充分混勻后室溫孵育 5 min,，5,000 g離心 1 min,，收集上清并立即用中和液緩沖液中和 pH （總洗脫液體積的 1/10），樣品可用于后期功能分析,。注：洗脫后蛋白短期可 4℃ 存放,，若要長(zhǎng)期存放建議置于 -20℃ 中。2) 變性洗脫法：此方法洗脫的樣品適用于 SDS-PAGE 檢測(cè),。在上述洗滌干凈的凝膠中加入 20-50 μL 2× SDS-PAGE Loading Buffer,，充分混勻后 95℃ 加熱 5 min。5000 g離心 1 min,，取上清進(jìn)行 SDS-PAGE 電泳檢測(cè),。注：由于常規(guī) SDS-PAGE Loading Buffer 中含有 β-疏基乙醇和 DTT會(huì)使填料中抗體輕重鏈斷開(kāi)，同時(shí)含有 SDS 的 Loading Buffer 可以使介質(zhì)配體變性,，因此變性洗脫后的 Anti-RFP 親和凝膠不能重復(fù)使用,。
注意事項(xiàng)：1. 本產(chǎn)品使用前務(wù)必充分重懸凝膠。2. 使用本產(chǎn)品進(jìn)行 IP 實(shí)驗(yàn)前,，需先確認(rèn)樣品中 RFP 標(biāo)簽蛋白的表達(dá)情況,。3. 為最大限度的降低蛋白質(zhì)降解，請(qǐng)配合使用 MCE 蛋白酶抑制劑 cocktails (MCE 貨號(hào) HY-K0010,，HY-K0011),。4. 不要使用含有 DTT 的細(xì)胞裂解液樣品，DTT 可能會(huì)引起凝膠上的 RFP 抗體脫落,。5. 本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用,，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品,。6. 為了您的安全和健康,，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。
銷(xiāo)售產(chǎn)品：Phenylephrine (hydrochloride) | Sildenafil | Bepirovirsen | Cholic acid | Irinotecan (hydrochloride) | Chetomin | Asciminib | Myristoleic acid | Fosmanogepix | Itraconazole
Trending products：Recombinant Proteins | Bioactive Screening Libraries | Natural Products | Dye Reagents | PROTAC | Isotope-Labeled Compounds
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