Anti-Flag 親和凝膠
MCE 國際站：Anti-Flag Affinity Gel
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件： -20℃ 兩年
簡介：MCE Anti-Flag Affinity Gel 用于細菌和哺乳動物細胞裂解物以及體外表達系統(tǒng)中 Flag 標簽蛋白的免疫沉淀、蛋白純化實驗,。
概述：MCE Anti-Flag 親和凝膠 (Anti-Flag Affinity Gel) 是由高質量的鼠源 lgG2b 單克隆抗體與瓊脂糖 Sepharose 4B 共價偶聯(lián)而得,，具有較高的 Flag (DYKDDDDK) 標簽融合蛋白結合容量 (>1.1 mg 蛋白/mL)，可用于細菌和哺乳動物細胞裂解物以及體外表達系統(tǒng)中 Flag 標簽蛋白的免疫沉淀 (IP) 實驗,。本產品蛋白荷載量高，特異性強,，也可用于免疫共沉淀 (Co-IP) 及蛋白純化實驗,。本產品每 1 mL 總體積中 0.5 mL 為凝膠。使用前,，需將凝膠充分重懸混勻后吸取,。
描述：
MCE Anti-Flag 親和凝膠是一種純化的小鼠 IgG2b 單克隆抗體，共價連接到瓊脂糖 Sepharose 4B,。該產品具有高蛋白結合能力（>1.1 mg 蛋白/mL）和穩(wěn)定性,，非常適合在 E.coli、酵母,、昆蟲和哺乳動物表達系統(tǒng)中表達的 Flag 標記蛋白的高性能純化或免疫沉淀 (IP),。
特點：
1. 方便省時。
2. 非特異性結合率低,。
3. 樣品損失最小,。
4. 蛋白結合能力高達 1.1 mg/mL。
操作說明：1. 凝膠預處理1.1 將 Anti-Flag 親和凝膠重懸混勻,，吸取 10 μL 凝膠懸液 (約 5 μL 凝膠) 至干凈的 1.5 mL 離心管,。1.2 加入 600 μL 洗滌緩沖液，混合均勻,，10,000 rpm 離心 30 秒,，棄去上清。重復 3-4 次,。注：小心吸取上清,，避免凝膠損失。2. 樣品的結合2.1 在上述清洗干凈的凝膠中加入 500 μL 細胞裂解液,。充分混勻后,，置于翻轉混合儀上孵育，4℃ 孵育 2 小時 (如需提高結合效率,，可延長至過夜),。2.2 10,000 rpm 離心 30 秒,，將上清轉移至新離心管 (上清液可用于檢測 Flag 標簽蛋白是否有殘留)。3. 洗滌在上述分離得到的凝膠中加入 500 μL 洗滌緩沖液,，充分混懸凝膠,，10,000 rpm 離心 30 秒，棄去上清,。重復以上洗滌步驟 3 次以上,，直到洗滌后的上清液中 OD280 小于 0.05 為止。注意：如上清液的 OD280 大于 0.05,，適當增加洗滌次數(shù)即可,。4. 洗脫本說明書提供三種 Flag 標簽蛋白洗脫方案，操作者可根據(jù)需要選擇不同的洗脫方案,。4.1 變性洗脫法：此方法洗脫的樣品適用于 SDS-PAGE 檢測,。步驟：在上述洗滌干凈的凝膠中加入 50 μL 1×SDS-PAGE Loading Buffer，充分混勻后煮沸 5 分鐘,。10,000 rpm 離心 30 秒,，取 4 μL 上清液進行 SDS-PAGE 檢測。4.2 酸性洗脫法：此方法洗脫的樣品保持原有生物活性,，可用于后期功能分析,。步驟：在上述洗滌干凈的凝膠中加入 50 μL 洗脫緩沖液 A，充分混勻后室溫孵育 10 分鐘,。10,000 rpm 離心 30 秒,，收集上清。按照每 50 μL 洗脫液加入 25 μL 中和緩沖液的比例加入中和緩沖液,，將洗脫產物 pH 調節(jié)至中性,，樣品可用于后期功能分析。4.3 競爭性洗脫：此方法洗脫的樣品保持原有生物活性,，可用于后期功能分析,。步驟：在上述洗滌干凈的凝膠中加入 30-50 μL 洗脫緩沖液 B。充分混勻后,，置于翻轉混合儀上孵育,，室溫孵育 1 小時或 4℃ 孵育 2 小時。10,000 rpm 離心 30 秒,，收集上清,，即得目的蛋白，樣品可用于后期功能分析
注意事項：1. 本產品使用前務必充分重懸凝膠,。2. 使用本產品進行 IP 實驗前,，需先確認樣品中 Flag 標簽蛋白的表達情況。3. 為最大限度的降低蛋白質降解,，請配合使用 MCE 蛋白酶抑制劑 cocktails (MCE 貨號：HY-K0010,，HY-K0011),。4. 不要使用含有 dithiothreitol (DTT) 的細胞裂解液樣品，DTT 可能會引起凝膠上的 Flag 抗體脫落,。5. 本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品,。6. 為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
常見問題：1. 檢測結果條帶背景過高,？A. 雜蛋白非特異性結合在抗體,、凝膠或離心管壁上。建議對裂解液進行預處理,，去除非特異性蛋白,；在最后一次洗滌前，將樣品轉移到新的離心管中操作,。B. 洗滌效果不佳。建議增加洗滌時間及次數(shù),；增加 NaCl 或去垢劑的濃度,。2. 檢測結果無條帶？A. Flag 標簽蛋白沒有表達,。建議操作：確保目的蛋白帶有 Flag 標簽,；制備新鮮裂解液；使用恰當?shù)牡鞍酌敢种苿?(如 MCE 產品：HY-K0010,，HY-K0011),。B. 孵育時間不足。建議延長孵育時間,。C. 裂解液中存在高濃度的 DTT或其他的還原劑等干擾物質,。建議選用合適的裂解液。D. 過分洗滌,。建議減少洗滌次數(shù),；降低 NaCl 或去垢劑的濃度
銷售產品：Hyaluronidase | G15 | Pemigatinib | (S)-Mephenytoin | Proteinase K | Sulfasalazine | Aspirin | PKM2-IN-1 | Auranofin | Indomethacin
Trending products：Recombinant Proteins | Bioactive Screening Libraries | Natural Products | Dye Reagents | PROTAC | Isotope-Labeled Compounds
4
立即詢價
您提交后,，專屬客服將第一時間為您服務