Anti-HA 磁珠
MCE 國(guó)際站：Anti-HA Magnetic Beads
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲(chǔ)條件：4°C 2 年
簡(jiǎn)介：Anti-HA Magnetic Beads 用于細(xì)菌和哺乳動(dòng)物細(xì)胞裂解物以及體外表達(dá)系統(tǒng)中 HA 標(biāo)記蛋白的免疫沉淀（IP）實(shí)驗(yàn),。
概述：MCE Anti-HA Magnetic Beads 由高質(zhì)量的鼠源 IgG3a 單克隆抗體與氨基磁珠共價(jià)偶聯(lián)制備，具有較高的 HA 標(biāo)簽融合蛋白加載容量 ( > 0.5 mg 蛋白 /mL),，可用于細(xì)菌和哺乳動(dòng)物細(xì)胞裂解物以及體外表達(dá)系統(tǒng)中 HA 標(biāo)記蛋白的免疫沉淀 ( IP ),。本產(chǎn)品可以通過(guò)磁力架 ( MCE 產(chǎn)品目錄號(hào): HY K0200) 或自動(dòng)分離儀器分離，實(shí)驗(yàn)便捷有效,。本產(chǎn)品蛋白核載量高,，特異性強(qiáng)，也可用于免疫共沉淀 ( Co-IP ) 和小量的蛋白質(zhì)純化,。
描述：
抗HA磁珠基于羥基磁珠,，粒徑為2μm，與高質(zhì)量鼠IgG3a單克隆抗體共價(jià)偶聯(lián),，該抗體可識(shí)別源自人流感血凝素（HA）蛋白的HA表位標(biāo)簽（YPYDVPDYA）,。
免疫沉淀過(guò)程中僅需少量磁珠，非特異性結(jié)合率低,。
• 方便省時(shí),。
• 非特異性結(jié)合率低。
• 樣品損失極少。
• 蛋白結(jié)合能力高達(dá) 0.6 mg/mL,。
• 穩(wěn)定,，一瓶解決方案。
操作說(shuō)明：1. 磁珠預(yù)處理混懸 Anti-HA Magnetic Beads,，取 10 μL 磁珠,，置于 1.5 mL EP 管中，加入 500 μL 洗滌緩沖液,，充分混懸,，置于磁力架上磁性分離，棄上清,。重復(fù)以上洗滌步驟 2 次,。2. 樣品的結(jié)合在上述分離得到的磁珠中加入 500 μL 細(xì)胞裂解液，充分混懸,，置于翻轉(zhuǎn)混合儀孵育,，室溫孵育 2 小時(shí)或者 4 °C 條件下孵育過(guò)夜。置于磁力架上磁性分離,，棄上清,。注意：結(jié)合過(guò)程中，磁珠可能會(huì)出現(xiàn)聚團(tuán)或呈片狀,，屬于正?，F(xiàn)象，不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果3. 洗滌在上述分離得到的磁珠中加入 500 μL 洗滌緩沖液,，充分混懸磁珠,，磁性分離，棄上清,。重復(fù)以上洗滌步驟 3 次。4. 洗脫本說(shuō)明書(shū)提供三種 HA 標(biāo)簽蛋白洗脫方案,，操作者可以根據(jù)后期檢測(cè)的需要選擇不同的洗脫方案,。a. 變性洗脫法：此方法洗脫的樣品適用于 SDS-PAGE 檢測(cè)。步驟：分離磁珠,，棄上清,，向磁珠中加入 50 μL 的 1× SDS-PAGE Loading Buffer 混合均勻 95°C 加熱 5 分鐘。分離磁珠,，收集上清至新的 EP 管,，進(jìn)行 SDS-PAGE 檢測(cè)。b. 酸性洗脫法：此方法洗脫的樣品保持原有生物活性,，可用于后期功能分析,。步驟：分離磁珠，棄上清，向磁珠中加入 50 μL 的洗脫緩沖液 A 混合均勻,，室溫孵育 10 分鐘,。分離磁珠，收集上清至新的 EP 管,，按每 50 μL 洗脫液加入 25 μL 中和緩沖液的比例加入中和緩沖液,，將洗脫產(chǎn)物 pH 調(diào)節(jié)至中性，樣品用于后期功能分析,。c. 競(jìng)爭(zhēng)性洗脫法：此方法洗脫的樣品保持原有生物活性,，可用于后期功能分析。步驟：分離磁珠,，棄上清,，向磁珠中加入 3-5 倍磁珠體積的洗脫緩沖液 B混合均勻，室溫孵育 1 小時(shí)或者 4°C 條件下孵育 1-2 小時(shí),。分離磁珠,，收集上清至新的 EP 管，即為目的蛋白,，樣品用于后期功能分析,。
注意事項(xiàng)：1. 本產(chǎn)品 pH 值為 6-8，禁止凍結(jié),。2. 本產(chǎn)品應(yīng)避免離心,、干燥或凍存，禁止長(zhǎng)時(shí)間置于磁場(chǎng),，可能會(huì)引起磁珠聚團(tuán),，樣品結(jié)合后操作過(guò)程應(yīng)輕柔，避免抗原脫落,。3. 使用本產(chǎn)品進(jìn)行 IP 實(shí)驗(yàn)前,，需先確認(rèn)樣品中 HA 融合蛋白的表達(dá)情況。4. 為最大限度的降低蛋白質(zhì)降解,，請(qǐng)配合使用 MCE 蛋白酶抑制劑 Cocktail (MCE 產(chǎn)品目錄號(hào): HY-K0010, HY-K0011),。5. 不要使用含 dithioth reitol (DTT) 的細(xì)胞裂解液樣品，DTT 可能會(huì)引起磁珠上的 HA 抗體脫落,。6. 本產(chǎn)品僅用于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究,，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品,。7. 為了您的安全和健康,，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
常見(jiàn)問(wèn)題：1. 檢測(cè)結(jié)果條帶背景過(guò)高,？A. 可能是由于蛋白非特異性結(jié)合到抗體,、磁珠或 EP 管上,，建議對(duì)裂解液進(jìn)行預(yù)處理，去除非特異結(jié)合的蛋白,；在最后一次洗滌前,，轉(zhuǎn)移整個(gè)樣品到新的 EP 管中，然后磁性分離或離心分離,。B. 洗滌效果不佳,，也會(huì)導(dǎo)致條帶較高的背景，建議增加洗滌時(shí)間與次數(shù),。2. 檢測(cè)結(jié)果無(wú)條帶,？A. HA 標(biāo)簽蛋白沒(méi)有表達(dá)可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果無(wú)條帶，建議操作：a. 確保目的蛋白帶有 HA 標(biāo)簽,；b. 制備新鮮的裂解液,；c. 使用恰當(dāng)?shù)牡鞍酌敢种苿?( 如 MCE 的產(chǎn)品：HY-K0010，HY-K0011) ,。B. 孵育時(shí)間不足可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果無(wú)條帶,，建議延長(zhǎng)孵育時(shí)間。C. 裂解液中存在高濃度的 DTT或其他的還原劑等干擾物質(zhì),，建議選用合適的裂解液,。
銷(xiāo)售產(chǎn)品：BI-2865 | Remdesivir | Dasatinib | Ionomycin (calcium) | Vemurafenib | SAG | Nivolumab (anti-PD-1) | Divarasib | Tucidinostat | Lactate
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