Anti-Flag 磁珠
MCE 國際站：Anti-Flag Magnetic Beads
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件：4℃ 2 年
簡介：Anti-Flag Magnetic Beads 可用于細(xì)菌和哺乳動物細(xì)胞裂解物以及體外表達(dá)系統(tǒng)中 Flag 標(biāo)記蛋白的免疫沉淀（IP）實驗，也可用于免疫共沉淀 (Co-IP) 和小量的蛋白質(zhì)純化實驗,。
概述：MCE Anti-Flag Magnetic Beads 由高質(zhì)量的鼠源 IgG1 單克隆抗體與氨基磁珠共價偶聯(lián)制備,，具有較高的 Flag (DYKDDDDK) 標(biāo)簽融合蛋白加載容量(>0.6 mg 蛋白/mL)，可用于細(xì)菌和哺乳動物細(xì)胞裂解物以及體外表達(dá)系統(tǒng)中 Flag 標(biāo)記蛋白的免疫沉淀 (IP) 實驗,。本產(chǎn)品可以通過磁力架 (MCE 產(chǎn)品目錄號：HY-K0200) 或自動分離儀器分離,，實驗便捷有效。本產(chǎn)品蛋白荷載量高,，特異性強,，也可用于免疫共沉淀 (Co-IP) 和小量的蛋白質(zhì)純化實驗。
描述：
Anti-Flag磁珠是基于氨基磁珠,，粒徑為200nm,，與高質(zhì)量識別Flag八肽序列（DYKDDDDK）的鼠IgG1單克隆抗體共價偶聯(lián)。
免疫沉淀時僅需少量磁珠,，非特異性結(jié)合率低,。
• 方便省時。
• 非特異性結(jié)合率低,。
• 樣品損失極小,。
• 蛋白結(jié)合能力高達(dá)0.6 mg/mL。
• 穩(wěn)定的一瓶解決方案,。
操作說明：1. 磁珠預(yù)處理混懸 Anti-Flag Magnetic Beads,，取 10 μL 磁珠,，置于 1.5 mL EP 管中，加入 500 μL 洗滌緩沖液,，充分混懸,，置于磁力架上磁性分離，棄上清,。重復(fù)以上洗滌步驟 2 次,。2. 樣品的結(jié)合在上述分離得到的磁珠中加入 500 μL 細(xì)胞裂解液，充分混懸,，置于翻轉(zhuǎn)混合儀孵育,，室溫孵育 2 小時或者 4oC 條件下孵育過夜。置于磁力架上磁性分離,，棄上清,。注意：結(jié)合過程中，磁珠可能會出現(xiàn)聚團或呈片狀,，屬于正?，F(xiàn)象，不會影響實驗結(jié)果3. 洗滌在上述分離得到的磁珠中加入 500 μL 洗滌緩沖液,，充分混懸磁珠,，磁性分離，棄上清,。重復(fù)以上洗滌步驟 3 次,，直到洗滌后的上清液中 OD280 小于 0.05 為止。注意：如上清液的 OD280 大于 0.05,，適當(dāng)增加洗滌次數(shù)即可,。4. 洗脫本說明書提供三種 Flag 標(biāo)簽蛋白洗脫方案，操作者可以根據(jù)后期檢測的需要選擇不同的洗脫方案,。a. 變性洗脫法：此方法洗脫的樣品適用于 SDS-PAGE 檢測,。步驟：分離磁珠，棄上清,，向磁珠中加入 50 μL 的 1×SDS-PAGE Loading Buffer 混合均勻,，95oC 加熱 5 分鐘。分離磁珠,，收集上清至新的 EP 管,，進(jìn)行 SDS-PAGE 檢測。b. 酸性洗脫法：此方法洗脫的樣品保持原有生物活性,，可用于后期功能分析,。步驟：分離磁珠，棄上清，向磁珠中加入50 μL的洗脫緩沖液A 混合均勻,，室溫孵育 10 分鐘,。分離磁珠，收集上清至新的 EP 管,，按每 50 μL 洗脫液加入 25 μL 中和緩沖液的比例加入中和緩沖液,，將洗脫產(chǎn)物 pH 調(diào)節(jié)至中性，樣品用于后期功能分析,。c. 競爭性洗脫法：此方法洗脫的樣品保持原有生物活性,，可用于后期功能分析。步驟：分離磁珠,，棄上清,，向磁珠中加入 3-5 倍磁珠體積的洗脫緩沖液 B混合均勻，室溫孵育 1 小時或者 4oC 條件下孵育 1-2 小時,。分離磁珠,，收集上清至新的 EP 管，即為目的蛋白,，樣品用于后期功能分析,。
注意事項：1. 本產(chǎn)品 pH 值為 6-8，禁止凍結(jié),。2. 本產(chǎn)品應(yīng)避免離心,、干燥或凍存,，禁止長時間置于磁場,，可能會引起磁珠聚團，操作過程應(yīng)輕柔,，避免抗體脫落,。3. 使用本產(chǎn)品進(jìn)行 IP 實驗前，需先確認(rèn)樣品中 Flag 標(biāo)簽融合蛋白的表達(dá)情況,。4. 為最大限度的降低蛋白質(zhì)降解,，請配合使用 MCE 蛋白酶抑制劑 cocktails (MCE 產(chǎn)品目錄號：HY-K0010，HY-K0011),。5. 不要使用含有 dithiothreitol (DTT) 的細(xì)胞裂解液樣品,，DTT 可能會引起磁珠上的 Flag 抗體脫落。6. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,，不得用于臨床診斷或治療,，不得用于食品或藥品。7. 為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作
常見問題：1. 檢測結(jié)果條帶背景過高,？A. 可能是由于蛋白非特異性結(jié)合到抗體、磁珠或 EP 管上，建議對裂解液進(jìn)行預(yù)處理,，去除非特異結(jié)合的蛋白,；在最后一次洗滌前，轉(zhuǎn)移整個樣品到新的EP 管中,，然后磁性分離或離心分離,。B. 洗滌效果不佳，也會導(dǎo)致條帶較高的背景,，建議增加洗滌時間與次數(shù),。2. 檢測結(jié)果無條帶？A. Flag 標(biāo)簽融合蛋白沒有表達(dá)可能導(dǎo)致檢測結(jié)果無條帶：建議操作：a. 確保目的蛋白帶有 Flag 標(biāo)簽,；b. 制備新鮮的裂解液,；c. 使用恰當(dāng)?shù)牡鞍酌敢种苿?(如 MCE 的產(chǎn)品：HY-K0010，HY-K0011),。B. 孵育時間不足可能導(dǎo)致檢測結(jié)果無條帶,，建議延長孵育時間。C. 裂解液中存在高濃度的 DTT或其他的還原劑等干擾物質(zhì),，建議選用合適的裂解液,。
銷售產(chǎn)品：SM-164 | S63845 | Biotin-azide | Neocarzinostatin | Indocyanine green | Celecoxib | BX795 | Cholesterol | Subasumstat | Rucaparib
Trending products：Recombinant Proteins | Bioactive Screening Libraries | Natural Products | Dye Reagents | PROTAC | Isotope-Labeled Compounds
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