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產(chǎn)地類別 | 國產(chǎn) | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 食品/農(nóng)產(chǎn)品,農(nóng)林牧漁 |
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一,、安定ELISA檢測試劑盒概要
安定作為一種鎮(zhèn)靜劑在畜牧業(yè)中的應(yīng)用所導(dǎo)致的藥物殘留對(duì)人類健康危害嚴(yán)重,歐盟、美國,、日本和我國等都禁止使用該藥物,。
二、安定檢測試劑盒原理
安定檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測組織(牛肉,、雞肉和豬肉)等樣本中的安定藥物(又名地xi泮,,Diazepam,DZP),,試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物,、抗體,、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時(shí),,加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本溶液,,樣本中的安定藥物和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗安定藥物抗體,加入酶標(biāo)記物后,,用TMB底物顯色,,樣本吸光度值與其所含安定藥物含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中安定藥物的殘留量。,。
三,、適用范圍
可定性、定量檢測動(dòng)物組織(雞,、豬,、牛、水產(chǎn)等)以及飼料產(chǎn)品中安定的殘留量,。
四,、技術(shù)指標(biāo)
1 試劑盒靈敏度:0.3ppb(ng/ml)
2 反應(yīng)模式:25℃,30min~30min~15min,。
3 檢測下限:
組織,、肝臟:5ppb 飼料:50ppb 尿液:5ppb
4 交叉反應(yīng)率:
地xi泮(安定):100% 硝xi泮:<10% 奧沙xi泮:<10%
5 樣本回收率:
組織、肝臟:90±25%
五,、安定ELISA檢測試劑盒組成
酶標(biāo)板,、標(biāo)準(zhǔn)液(6個(gè))、高標(biāo)準(zhǔn)液,、酶標(biāo)記物,、抗體工作液、底物液A,、底物液B,、終止液、濃縮洗滌液,、復(fù)溶液
六,、貯藏條件及保存期
儲(chǔ)藏條件:試劑盒于2-8℃保存,不要冷凍,。
保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,,生產(chǎn)日期見包裝盒。
酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟
將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,,將不用的微孔板放入自封袋,,保存于2-8℃。
1 編 號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),,每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
2 加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,,然后加抗體工作液50µl/孔,,輕輕振蕩5秒混勻,,25℃避光反應(yīng)30分鐘。
3 洗 滌:小心揭開蓋板膜,,甩去孔內(nèi)液體,,每孔加350ul工作洗滌液,靜置30秒后棄去,,重復(fù)洗滌5次,,最后一次拍干(用吸水紙拍干,拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破),。
4 加酶反應(yīng):加酶標(biāo)記物100µl/孔,,25℃避光反應(yīng)30分鐘。
5 洗 滌:同上
6 顯 色:加底物液A 50µl/孔,,再加底物液B 50µl/孔,,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鐘(若藍(lán)色過淺,,可適當(dāng)延長反應(yīng)時(shí)間),。
7 終 止:每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,,終止反應(yīng),。
8 測吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm)。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成,。
結(jié)果分析
1 百分吸光率的計(jì)算
標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,,再乘以100%,即
百分吸光度值(%)=A×100%
A0
A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),,對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),,繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對(duì)數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實(shí)際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,,更便于大量樣本的準(zhǔn)確,、快速分析。(歡迎來電索?。?/span>
注意事項(xiàng)
1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫(25℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低,。
2 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作,。
3 混合要均勻,,洗板要徹di,,在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,。
4 在所有孵育過程中,,用蓋板膜封住微孔板,避免光線照射,。
5 不要使用過了有效期的試劑盒,,不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。
6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),,應(yīng)當(dāng)棄之,。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位(A450nm< 0.5 )時(shí),表示試劑可能變質(zhì),。
7 反應(yīng)終止液有腐蝕性,,避免接觸皮膚。