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訪問次數(shù):256更新時間:2023-06-08 17:02:33
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一、己烯雌酚檢測試劑盒概要
己烯雌酚(Diethylstilbestrol,,DES)是甾類同化激素,被大量用于促進反芻動物的生長,。但由于己烯雌酚存在明顯的致癌性,,歐美等發(fā)達國家已相繼禁止或嚴(yán)格禁止使用。我國農(nóng)業(yè)部第235號文件中規(guī)定,,動物源性食品中己烯雌酚的殘留xian量為不得檢出,。
二、己烯雌酚檢測試劑盒原理
己烯雌酚試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測尿樣,、組織,、飼料等樣本中的己烯雌酚,試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板,、酶標(biāo)記物,、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成,。檢測時,,加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液,,樣本中的己烯雌酚和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗己烯雌酚抗體,加入酶標(biāo)記物后,,用TMB底物顯色,,樣本吸光度值與其所含己烯雌酚含量成負相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中己烯雌酚的殘留量,。
三,、適用范圍
己烯雌酚試劑盒可定性、定量檢測動物組織(肌肉,、肝臟等),、尿液、飼料等樣品中己烯雌酚的殘留量,。
四,、 技術(shù)指標(biāo)
1 試劑盒靈敏度:0.1ppb(ng/ml)
2 反應(yīng)模式:37℃,30min~30min~15min,。
3 檢測下限:
組織(蝦,、魚):0.2ppb
豬肉/肝、雞肉/肝:2ppb
飼料:……20ppb
尿液:……0.6ppb
4 交叉反應(yīng)率:
己烯雌酚:100%
雙烯雌酚:38.5%
己烷雌酚:8.5%
己炔雌二醇:<0.1%
雌三醇:…<0.1%
5 樣本回收率:
尿 樣 : 70%±10%
組 織 : 85%±10%
飼 料 : 90%±10%
五試劑盒組成
酶標(biāo)板,、標(biāo)準(zhǔn)品,、高標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)記物,、抗體工作液,、底物液A、底物液B,、終止液,、濃縮洗滌液、復(fù)溶液
六,、貯藏條件及保存期
儲藏條件:試劑盒于2-8℃保存,,不要冷凍。
保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,,生產(chǎn)日期見包裝盒,。
酶聯(lián)免疫試驗步驟
將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,,每種液體試劑使用前均須搖勻,。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,,保存于2-8℃,。
1 編 號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置,。
2 加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液或樣本50µl/孔到各自的微孔中,,然后加抗體工作液50µl/孔,輕輕振蕩5秒混勻,,25℃避光反應(yīng)30分鐘,。
3 洗 滌:小心揭開蓋板膜,甩去孔內(nèi)液體,,每孔加350ul工作洗滌液,,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,,最后一次拍干(用吸水紙拍干,,拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
4 加酶反應(yīng):加酶標(biāo)記物100µl/孔,,25℃避光反應(yīng)30分鐘,。
5 洗 滌:同上
6 顯 色:加底物液A 50µl/孔,再加底物液B 50µl/孔,,輕輕振蕩5秒混勻,,25℃避光顯色15分鐘(若藍色過淺,可適當(dāng)延長反應(yīng)時間),。
7 終 止:加終止液50µl/孔,,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng),。
8 測吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm),。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。
結(jié)果分析
1 百分吸光率的計算
標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,,再乘以100%,,即
百分吸光度值(%)=A×100%
A0
A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算
以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對數(shù)為橫坐標(biāo),,繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對數(shù)曲線圖,。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實際濃度,。