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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號 | IM-H392 |
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Kasumi-1人急性原粒細胞白血病細胞產(chǎn)品基本信息
細胞名稱:Kasumi-1人急性原粒細胞白血病細胞
來源:ATCC
規(guī)格:1x106cells/T25或1mL凍存管
細胞貨期現(xiàn)貨,,1周左右
種屬來源:人
組織來源:外周血
細胞形態(tài):原粒細胞
生長特性:懸浮生長
培養(yǎng)基: RPMI-1640+20% FBS+1%GlutaMAX-1谷+氨酰胺
1%Sodium Pyruvate丙酮酸鈉+PS
生長條件:氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
傳代方法:1:2至1:4,每周 3次
凍存條件:無血清凍存液,,液氮儲存
支原體檢測:無
注意事項:限于科學研究等非醫(yī)療目的,,不可用于人類或者動物的臨床診斷使用
注意:收貨時發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)物中有部分死細胞和細胞碎片,此為正?,F(xiàn)象,。該細胞會有輕微聚團,輕輕吹開即可,。細胞密度應保持在合適范圍,,不能過稀。
細胞培養(yǎng)操作
1)復蘇細胞:將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,,加1-2 mL培養(yǎng)基后輕輕吹勻,。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入6 cm皿中,,加入約4 mL培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜),。第二天換液并檢查細胞密度,。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng),。
方法一:收集細胞,,1000RPM條件下離心3-5min分鐘,棄去上清液,,補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,,將細胞懸液按1:2到1:4的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例;
a,、收集細胞及細胞培養(yǎng)液,,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,,棄去上清液,,用PBS清洗一遍,,棄盡PBS,,然后進行細胞計數(shù),。
b,、根據(jù)細胞數(shù)量對應加入無血清細胞凍存液,,使細胞密度5×106~1×107/mL,輕輕混勻,,每支凍存管凍存1mL細胞懸液,,注意凍存管做好標識,。
c,、將凍存管放入-80℃冰箱,,24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。
培養(yǎng)注意事項
1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象,,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系,。
2. 仔細閱讀細胞說明書,,了解細胞相關信息,,如細胞形態(tài),、所用培養(yǎng)基、血清比例,、所需細胞因子等,,確保細胞培養(yǎng)條件一致,若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題,,責任由客戶自行承擔。
3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面,,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),。因運輸問題,部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞,,死亡破碎形成碎片,,是正常現(xiàn)象,。觀察好細胞狀態(tài)后,,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h,。
4. 貼壁細胞可以消化,,懸浮細胞直接混勻收集細胞,,900 rpm-1000 rpm離心3 min,,棄上清。加5 mL PBS重懸細胞,,再900 rpm-1000 rpm離心3 min,,,用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞,,并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng),。
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。
6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片,,記錄細胞狀態(tài),,便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,,請及時和我們聯(lián)系,告知細胞的具體情況,,以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決,。
7. 該細胞僅供科研使用。
8. 備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。收到細胞后一次傳代建議1:2傳代 ,。
9.注意: 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿,。不是1個T25瓶傳2個10cm皿,。
懸浮細胞收貨注意事項:
1,、收貨時需鏡下拍照(看密度,、狀態(tài))
2、靜置后需鏡下拍照(看整體密度)
a.如密度50%以下,,建議換液并豎瓶培養(yǎng)
b.如密度50%-80%,,建議換液培養(yǎng),隔天觀察密度
c.如密度90%,,建議傳代
3,、換液及傳代處理前,培養(yǎng)瓶豎著放置至少半小時(使細胞沉到瓶底);收集上清,,必須將瓶內所有培養(yǎng)基(70ml)全部收集!并用PBS(10ml)潤洗瓶底并收集!離心轉速為1000rpm,,5min。