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HSF人皮膚成纖維細(xì)胞（免疫熒光鑒定）產(chǎn)品基本信息：

細(xì)胞名稱：HSF人皮膚成纖維細(xì)胞

來源：IMMOCELL

細(xì)胞規(guī)格：1x106cells/T25或1mL凍存管

細(xì)胞貨期：現(xiàn)貨,，1周左右

種屬來源：人

組織來源：皮膚

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

培養(yǎng)基：90%DMEM+10% FBS+PS

生長(zhǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

傳代方法：1:2至1:3，每周 3次

凍存條件：無血清凍存液,，液氮儲(chǔ)存

支原體檢測(cè)：無

HSF人皮膚成纖維細(xì)胞（免疫熒光鑒定）檢測(cè)報(bào)告：

細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1)復(fù)蘇細(xì)胞

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心5 min,，棄去上清液,，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中,，加入約4mL培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2)細(xì)胞傳代

如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a,、棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。

b,、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02?TA)于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞,，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min(視細(xì)胞情況而定),，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml*培養(yǎng)基終止消化,。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,，1000 rpm離心5 min，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻,。

c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

3)細(xì)胞凍存

待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例;

a,、收集細(xì)胞,，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min,，棄去上清液,，用PBS清洗一遍，棄盡PBS,，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液,，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL,，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,，注意凍存管做好標(biāo)識(shí),。

c、將凍存管放入-80℃冰箱,，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。

培養(yǎng)注意事項(xiàng)

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象，干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞檢查干冰是否*揮發(fā),，細(xì)胞是否解凍,，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,，了解細(xì)胞相關(guān)信息,，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基,、血清比例,、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致,，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題,，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象,。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置2-4h,。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化,，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min,，棄上清,。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min,，,，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng),。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決,。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：為防止回收培養(yǎng)基時(shí)操作造成污染,，運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)建議不再用來培養(yǎng)細(xì)胞,，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后*一次傳代建議1：2傳代 ,。

9. 注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿,。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。