一,、背景

呼吸機(jī)引起的肺損傷 （VILI） 是急性肺損傷 （ALI） 或急性呼吸窘迫綜合征 （ARDS） 患者最常見(jiàn)的并發(fā)癥之一,。雖然p120是調(diào)節(jié)細(xì)胞連接的重要蛋白質(zhì),，但應(yīng)探索預(yù)防和治療VILI的進(jìn)一步機(jī)制。

二,、方法

用p12小干擾（si）RNA,，p120 cDNA，野生型E-鈣粘蛋白并列膜結(jié)構(gòu)域或K120R突變并列膜結(jié)構(gòu)域（K83R-JMD）轉(zhuǎn)染的小鼠肺上皮細(xì)胞（MLE-83）進(jìn)行20%循環(huán)拉伸2或4小時(shí),。此外,，用c-Src抑制劑PP預(yù)處理的MLE-12細(xì)胞和小鼠2或RhoA抑制劑Y27632，分別經(jīng)歷20%的循環(huán)拉伸或機(jī)械拉伸,。此外,，野生型C57BL / 6小鼠在機(jī)械通氣前轉(zhuǎn)染p120 siRNA-脂質(zhì)體復(fù)合物。然后分析細(xì)胞裂解物和肺組織以檢測(cè)肺損傷,。

三,、結(jié)果

20%活性c-Src的循環(huán)拉伸，誘導(dǎo)E-鈣粘蛋白，p120和封閉素的降解,。然而,，p120的缺失增加了E-鈣粘蛋白的降解和內(nèi)吞作用。免疫沉淀和免疫熒光結(jié)果顯示p120和E-鈣粘蛋白之間的關(guān)聯(lián)降低,，而p120 siRNA和K83R-JMD組在20%循環(huán)拉伸后間隙形成增加,。p120的缺失還降低了閉塞素水平，并通過(guò)增強(qiáng)RhoA活性降低了閉塞素和ZO-1的關(guān)聯(lián),。然而,，封閉素和E-鈣粘蛋白水平的改變被PP逆轉(zhuǎn)2或Y27632處理與循環(huán)拉伸組相比,。一致地,，p120過(guò)表達(dá)組在20%循環(huán)拉伸后，連接蛋白的表達(dá),、再分布和解離均恢復(fù),。此外，p120在機(jī)械通氣下通過(guò)增加濕/干稱重比和增加p120耗盡小鼠細(xì)胞因子（腫瘤壞死因子-α和白細(xì)胞介素-六）的產(chǎn)生來(lái)證實(shí)p<>在VILI中的作用,。

細(xì)胞機(jī)械循環(huán)拉伸

圖1

環(huán)狀拉伸對(duì)粘附連接蛋白和緊密連接蛋白的影響,。將柔性細(xì)胞板上的MLE-12細(xì)胞單層經(jīng)受20%循環(huán)拉伸2或4小時(shí)。 （a）蛋白質(zhì)印跡顯示p120,，E-鈣粘蛋白和封閉素在循環(huán)拉伸后減少,。（b） 提取膜和細(xì)胞質(zhì)蛋白。通過(guò)蛋白質(zhì)印跡測(cè)定E-鈣粘蛋白在膜和細(xì)胞質(zhì)中的表達(dá),。周期性拉伸可誘導(dǎo)E-鈣粘蛋白內(nèi)吞作用,。（c）免疫熒光染色和定量數(shù)據(jù)顯示p120和E-鈣粘蛋白在循環(huán)拉伸下結(jié)合。固定MLE-12細(xì)胞并用抗p120和抗E-鈣粘蛋白染色,，然后用Alexa偶聯(lián)的二抗染色,。（d）肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架重塑是通過(guò)用德克薩斯紅偶聯(lián)鬼筆環(huán)肽（紅色）進(jìn)行免疫熒光染色來(lái)確定的。由循環(huán)拉伸引起的細(xì)胞間隙用箭頭標(biāo)記,。細(xì)胞核（藍(lán)色）用4′,，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）染色。比例尺 = 10 μm,。*p < 0.05 與對(duì)照組相比,，+p < 0.05 與 CS 2 h 組相比。實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)三次

四,、結(jié)論

p120通過(guò)調(diào)節(jié)粘附和緊密連接來(lái)防止VILI,。p120通過(guò)增加p120與E-鈣粘蛋白的并列膜結(jié)構(gòu)域之間的關(guān)聯(lián)來(lái)抑制E-鈣粘蛋白內(nèi)吞作用。此外,，p120通過(guò)抑制RhoA活性來(lái)減少閉塞素的降解,。這些發(fā)現(xiàn)說(shuō)明了p120預(yù)防VILI的進(jìn)一步機(jī)制，特別是對(duì)于ALI或ARDS患者。

CELL TANK

國(guó)產(chǎn)細(xì)胞牽張拉伸應(yīng)力培養(yǎng)系統(tǒng)

HOW TO USE

1. 細(xì)胞外基質(zhì)涂層進(jìn)行預(yù)處理,，將細(xì)胞接種到腔室中,，細(xì)胞粘附在基底上，開(kāi)始過(guò)夜培養(yǎng)過(guò)程,。

2. 細(xì)胞增殖后,，選擇拉伸模式并開(kāi)始循環(huán)刺激。

3. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)收獲/處理細(xì)胞,，分析數(shù)據(jù),。

橫桿拉伸技術(shù)局部應(yīng)變率更均勻

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