試劑盒采用雙抗原一-步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA) 。往預(yù)先包被病毒性腹瀉病毒抗ti的包被微孔中,，依次加入標(biāo)本,、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗原,，經(jīng)過溫育并徹di洗滌,。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在suan的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。用酶標(biāo)儀在450NM波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值) ，與CUTOFF值相比較,，從而判定標(biāo)本中豬病毒性腹瀉病毒(BVDV) 的存在與否,。

樣品收集、處理及保存方法:

1.血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。

2.血漿: EDTA,、檸檬suan鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清,。

3.細(xì)胞上清液: 3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。

4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn) 離心10分鐘取上清,。

5.保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20°C,， 避免反復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

組織蛋白酶K(cath-K)倉(cāng)鼠elisa試劑盒自備物品:

1.酶標(biāo)儀(450NM)

2.高精度加樣器及槍頭: 0.5-10UL,、 2-20UL,、 20-200UL、 200-1000UL

3.37℃恒溫箱

操作注意事項(xiàng)

1.試劑盒保存在2-8°C，使用前室溫平衡20分鐘,。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶,，這屬于正常現(xiàn)象,，水浴加熱使結(jié)晶完quan溶解后再使用,。

2.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封(低溫干燥)保存,。

3.預(yù)處理后的樣本請(qǐng)按照操作步驟用樣ben稀釋ye適當(dāng)稀釋以達(dá)到試劑盒的的最jia檢測(cè)效果,。

4.嚴(yán)格按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作,。

5.所有液體組分使用前充分搖勻,。

倉(cāng)鼠組織蛋白酶K(cath-K)ELISA試劑盒

常用方法：

1. 夾心法：

夾心法常用于檢測(cè)大分子抗原，一般的操作步驟為:

a. 將具有專一性的抗ti固著（coating）于塑膠孔盤上,，完成后洗去多余抗ti

b. 加入待測(cè)檢體,，檢體中若含有待測(cè)的抗原，則其會(huì)與塑膠孔盤上的抗ti進(jìn)行專一性鍵結(jié)

c. 洗去多余待測(cè)檢體,，加入另一種對(duì)抗原專一的一次抗ti,，與待測(cè)抗原進(jìn)行鍵結(jié)

d. 洗去多余未鍵結(jié)一次抗ti，加入帶有酶的二次抗ti,，與一次抗ti鍵結(jié)

e. 洗去多余未鍵結(jié)二次抗ti,，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果

原理：針對(duì)抗原分子上2個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗ti分別作為固相抗ti和酶標(biāo)抗ti,，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標(biāo)抗原結(jié)合物,。

2. 間接法

間接法常用于檢測(cè)抗ti，一般的操作步驟為：

a. 將已知的抗原固著于塑膠孔盤上,，完成后洗去多余的抗原,。

b. 加入待測(cè)檢體，檢體中若含有待測(cè)的一次抗ti,，則其會(huì)與塑膠孔盤上的抗原進(jìn)行專一性鍵結(jié),。

c. 洗去多余待測(cè)檢體，加入帶有酶的二次抗ti,，與待測(cè)的一次抗ti鍵結(jié),。

d. 洗去多余未鍵結(jié)二次抗ti，加入酶底物使酶呈色,，藉儀器（ELISA reader）測(cè)定塑膠盤中的吸光值（OD值）,，以評(píng)估有色終產(chǎn)物的含量即可測(cè)量待測(cè)抗ti的含量。

原理：利用酶標(biāo)記的抗抗ti以檢測(cè)已與固相結(jié)合的受檢抗ti,。

3. 競(jìng)爭(zhēng)法

競(jìng)爭(zhēng)法是一種較少用到的ELISA檢測(cè)機(jī)制,，一般用于檢測(cè)小分子抗原,，其操作步驟為：

a. 將具有專一性的抗ti固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗ti

b. 加入待測(cè)檢體,，使檢體中的待測(cè)抗原與塑膠孔盤上的抗ti進(jìn)行專一性鍵結(jié)

c. 加入帶有酶的抗原,，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗ti進(jìn)行專一性鍵結(jié)，由于塑膠孔盤上固著的抗ti數(shù)量有限,，因此當(dāng)檢體中抗原的量越多,，則帶有酶的抗原可鍵結(jié)的固著抗ti就越少，亦即,，兩種抗原皆競(jìng)相與塑膠孔盤上抗ti鍵結(jié),，即所謂競(jìng)爭(zhēng)法之由來(lái)

d. 洗去檢體與帶有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色,，當(dāng)檢體中抗原量越多,，代表塑膠孔盤內(nèi)留下之帶有酶的抗原越少，顯色也就越淺

e. 當(dāng)需要偵測(cè)無(wú)法獲得兩種以上單一性抗ti的抗原,，或是不易得到足夠的純化抗ti以固著于孔盤上時(shí),，一般會(huì)考慮使用競(jìng)爭(zhēng)法ELISA。

標(biāo)本要求 :

1．不能檢測(cè)含NaN3的樣品,，因NaN3辣根過氧化物酶的（HRP）活性

2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣

4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值)，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍) 后再測(cè)定,，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀釋倍數(shù)(xnx5)

5.封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染

6.底物請(qǐng)避光保存

7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)

8.所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理

9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。

訂購(gòu)說(shuō)明:

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