Edman降解 vs 全長測序：從N端到C端的完整分析策略檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

在dànbáizhì功能研究,、重組蛋白驗證以及抗體藥開發(fā)過程中,，一級結(jié)構(gòu)的jīngquè確認（即氨基酸的線性序列）是zuì基礎(chǔ)也是zuì關(guān)鍵的一步。為實現(xiàn)這一目標(biāo),，科研人員常用兩種技術(shù)路徑：

• Edman降解：一種經(jīng)典的化學(xué)方法,，專注于N端氨基酸的逐個解析；

• 蛋白全長de novo測序：基于高分辨質(zhì)譜與AI算法,，可還原從N端到C端的完整蛋白序列,。

這兩種技術(shù)各有優(yōu)勢，也各有局限,。那么在實際項目中,，究竟該如何組合使用？是否存在一套更高效,、更全面的N端+C端一體化結(jié)構(gòu)分析策略,？本文將從技術(shù)原理、適用場景,、數(shù)據(jù)互補性及策略建議等方面,，為您系統(tǒng)梳理 Edman 降解與全長測序的協(xié)同應(yīng)用價值。

一,、Edman降解：jīngzhǔn,、可視的N端序列讀取方式

1、原理回顧

Edman降解通過苯異硫氰酸酯（PITC）選擇性標(biāo)記蛋白的游離N端α-氨基酸,，在每一輪循環(huán)中切除并鑒定一個殘基,。該方法對氨基酸順序的“逐步確認"具有jígāo可信度。

2,、技術(shù)優(yōu)勢

（1）高精度：每一輪序列結(jié)果都基于化學(xué)反應(yīng)確證,；

（2）低背景：適用于單條帶、高純度蛋白,；

（3）不依賴數(shù)據(jù)庫或質(zhì)譜算法，結(jié)果直觀,；

（4）對起始殘基的識別能力強,，可判斷N端修飾/缺失/突變。

3,、局限性

（1）jǐnxiànN端游離蛋白（若N端被修飾或封閉則無效）,；

（2）無法識別蛋白內(nèi)部結(jié)構(gòu)；

（3）一般測序深度限制在10–15個氨基酸以內(nèi),；

（4）需要蛋白純度高,，且點樣量不少于5–10 pmol。

二、全長測序：從譜圖碎片還原蛋白全結(jié)構(gòu)

1,、原理簡述

蛋白全長測序采用多種蛋白酶（Trypsin,、Glu-C、Asp-N 等）裂解目標(biāo)蛋白,，生成一系列重疊肽段,；經(jīng)高分辨質(zhì)譜檢測后，通過AI拼接算法（如 PEAKS,、pNovo,、DeepNovo 等）直接從原始譜圖中還原蛋白的完整氨基酸序列，而無需參考數(shù)據(jù)庫,。

2,、技術(shù)優(yōu)勢

（1）不依賴已知序列，適用于未知蛋白,、突變體,、人工構(gòu)建體；

（2）可識別單點突變,、異構(gòu)體混合,、剪接變體；

（3）同時解析N端,、C端,、內(nèi)部結(jié)構(gòu)與翻譯后修飾（PTMs）；

（4）起始量可低至1–10 ng,，適用于低豐度樣本,。

3、局限性

（1）N端解析依賴肽段生成情況,，可能遺漏起始殘基,；

（2）C端肽段較大或修飾多樣時，識別難度上升,；

（3）結(jié)果依賴于譜圖質(zhì)量與拼接算法,；

（4）數(shù)據(jù)分析較為復(fù)雜，需人工復(fù)核與算法聯(lián)合判斷,。

三,、典型應(yīng)用策略推薦

?? 場景一：重組抗體測序驗證

• 痛點：表達產(chǎn)品是否保留起始殘基？是否存在輕微突變,？

• 推薦策略：Edman用于輕/重鏈N端jīngquè定位,，全長測序確認V區(qū)結(jié)構(gòu)與C端構(gòu)建完整性

?? 場景二：融合蛋白功能區(qū)拼接確認

• 痛點：連接區(qū)是否完整表達？C端是否出現(xiàn)延伸或標(biāo)簽缺失,？

• 推薦策略：全長測序拼接全段結(jié)構(gòu),，Edman確認起始殘基與剪切位置

?? 場景三：未知蛋白一級結(jié)構(gòu)解析

• 痛點：數(shù)據(jù)庫無匹配,、無核酸序列可供參考

• 推薦策略：全長測序主體結(jié)構(gòu)解析 + Edman補強N端結(jié)果，實現(xiàn)數(shù)據(jù)庫獨立識別

四,、百泰派克的一體化結(jié)構(gòu)分析方案

百泰派克生物科技依托高分辨率質(zhì)譜平臺（Orbitrap Eclipse,、timsTOF Pro）與自動化Edman測序儀，提供如下服務(wù)組合：

• Edman測序服務(wù)：支持PVDF膜直接上樣,，zuì低檢測量1 pmol,，序列深度可達15殘基；

• 蛋白全長測序服務(wù)：多酶裂解+AI算法拼接+人工復(fù)核,，支持修飾識別,、異構(gòu)體分析；

• 一體化結(jié)構(gòu)報告輸出：包括全序列圖,、突變標(biāo)注,、修飾位點、端基確認信息,，滿足生物藥注冊和IND申報需要,。

我們致力于幫助科研和藥企從“看到序列"到“理解結(jié)構(gòu)"，打通dànbáizhì從N端到C端的閉環(huán)表達驗證路徑,。在dànbáizhì結(jié)構(gòu)驗證的任務(wù)中,，沒有一種技術(shù)可以“包打天下"，只有合理組合多種技術(shù),，才能獲得更高分辨率,、更高可信度的結(jié)構(gòu)全景。

百泰派克生物科技特色項目

一,、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進行分析,，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù)，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,，Nduāncèxù,，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù),。對于未知理論序列的dànbáizhì,，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務(wù)，對蛋白序列進行分析,。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液,、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉,，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二,、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC,，提供定量dànbáizhì組學(xué),、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué),、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù),。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù),，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作,。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析,，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織,、細胞,、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實驗結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測較低豐度蛋白,，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析,，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三,、單細胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進行單細胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析,，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞,，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質(zhì)量譜,，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細胞表面和內(nèi)部的信號分子表達量。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.技術(shù)優(yōu)良,，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題,?？稍趩渭毎麑用嫔蠈Χ喾N指標(biāo)同時進行表征,，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大,，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右,，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞,，實現(xiàn)了數(shù)量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq,。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細胞亞群的變化,，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景,；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會有新應(yīng)用方向,。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾,；

③可檢測細胞存活率,、細胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達量,、DNA合成速率以及蛋白酶活性等,。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的,、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別,。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺進行免疫肽組學(xué)分析,，可從zuì小的樣品材料中進行可重復(fù)的識別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究,，旨在助力科研工作者尋找癌癥,、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo),。

五,、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF,，高效色譜分離技術(shù),，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì,、多肽,、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析,，到產(chǎn)品變異性和純度分析,。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì),。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征,，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務(wù)。公司實驗室遵循NMPA,、ICH,、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認證，建立了完備的質(zhì)量體系,，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份,，設(shè)備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤,，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā),、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行,。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù),；

2.獲國家CNAS實驗室認可,，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué),、多肽組學(xué),、代謝組學(xué)、生物藥物表征,、單細胞分析,、單細胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等,；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺,，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè),，10000+客戶的選擇,；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

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