Edman降解如何實(shí)現(xiàn)N端蛋白質(zhì)測(cè)序？步驟與機(jī)制解析檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

Edman降解如何實(shí)現(xiàn)N端dànbáizhì測(cè)序,？Edman降解的核心原理是基于N端氨基酸的化學(xué)選擇性降解,，通過(guò)環(huán)化裂解逐步去除dànbáizhìN端的氨基酸，并以穩(wěn)定的衍生物形式進(jìn)行檢測(cè),。該方法基于化學(xué)反應(yīng)，利用異硫氰酸苯酯（PITC）特異性地與N端氨基酸結(jié)合,，通過(guò)逐級(jí)切除并鑒定多肽鏈N端的氨基酸,，實(shí)現(xiàn)N端dànbáizhì測(cè)序。Edman降解其核心步驟分為偶聯(lián),、裂解,、轉(zhuǎn)化與檢測(cè)，循環(huán)重復(fù)直至目標(biāo)序列解析完成,。以下為詳細(xì)步驟及機(jī)制解析：

一,、Edman降解的詳細(xì)實(shí)驗(yàn)步驟

1、樣品準(zhǔn)備

（1）dànbáizhì純化：確保蛋白樣品高純度,，以減少背景噪聲,。

（2）固定化處理：通常使用玻璃纖維膜或PVDF膜固定樣品,，以提高降解穩(wěn)定性。

（3）檢查N端封閉情況：確保dànbáizhìN端沒有乙?；?、甲基化等修飾，否則Edman降解無(wú)法進(jìn)行,。

2,、反應(yīng)流程

（1）PITC標(biāo)記：在堿性緩沖液（如三乙胺）中加入PITC，使其與N端氨基結(jié)合,。

（2）酸性裂解：用三fúyǐsuān（TFA）促進(jìn)環(huán)化反應(yīng),，使PTH-氨基酸從肽鏈中斷裂。

（3）有機(jī)溶劑萃?。河糜袡C(jī)溶劑萃取生成的PTH-氨基酸,，以便進(jìn)行檢測(cè)。

3,、PTH-氨基酸鑒定

采用高效液相色譜（HPLC）進(jìn)行分離分析,。通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)PTH-氨基酸對(duì)照，確定具體的氨基酸種類,。

4,、重復(fù)循環(huán)

清洗反應(yīng)體系，去除殘余PTH-氨基酸,。繼續(xù)降解下一個(gè)氨基酸,，直至實(shí)現(xiàn)完整N端dànbáizhì測(cè)序。

二,、Edman降解的機(jī)制解析

1,、選擇性化學(xué)反應(yīng)

PITC能夠特異性地與N端氨基酸發(fā)生反應(yīng)，而不會(huì)影響dànbáizhì內(nèi)部的肽鍵,。

2,、溫和的降解條件

相比其他化學(xué)降解方法（如水解法），Edman降解的條件較溫和,，避免了dànbáizhì或多肽的整體破壞,。

3、高效的環(huán)化裂解

通過(guò)酸性環(huán)境誘導(dǎo)環(huán)化反應(yīng),，使N端氨基酸高效釋放,，同時(shí)肽鏈的其余部分保持完整。

4,、穩(wěn)定的PTH-氨基酸分析

PTH-氨基酸具有穩(wěn)定的光學(xué)特性,，能夠通過(guò)HPLC等方法準(zhǔn)確檢測(cè)。

三,、Edman降解的優(yōu)點(diǎn)與局限

1,、優(yōu)點(diǎn)：

（1）高專一性識(shí)別N端序列,，無(wú)需數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)

（2）可用于確認(rèn)蛋白翻譯起始位點(diǎn)或標(biāo)簽序列

（3）對(duì)于小肽、合成肽,、修飾蛋白等提供準(zhǔn)確N端結(jié)構(gòu)驗(yàn)證

2,、局限：

（1）需高純度、均一性蛋白樣品（雜質(zhì)影響明顯）

（2）無(wú)法解析有N端阻斷（如乙?；?、修飾）的蛋白

（3）序列過(guò)長(zhǎng)或樣品復(fù)雜度高時(shí)通量低

（4）對(duì)翻譯后修飾識(shí)別能力有限

Edman降解通過(guò)化學(xué)反應(yīng)的jīngzhǔn級(jí)聯(lián)，實(shí)現(xiàn)了N端氨基酸的逐級(jí)解析,。盡管面臨通量低,、長(zhǎng)度受限等挑戰(zhàn)，其在短肽測(cè)序,、N端修飾檢測(cè)及法規(guī)質(zhì)控中的bùkětìdài性,，使其在現(xiàn)代dànbáizhì科學(xué)中仍占有一席之地。未來(lái),，與質(zhì)譜,、微流控及人工智能的深度融合，或?qū)檫@一經(jīng)典技術(shù)注入新的活力,。百泰派克生物科技7大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái),，滿足您一站式基于Edman降解的蛋白N端序列分析服務(wù)需求，致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù),！

Edman降解 vs 質(zhì)譜：誰(shuí)更適合你,？

百泰派克生物科技配備自動(dòng)化Edman降解儀與高靈敏HPLC系統(tǒng),，結(jié)合質(zhì)譜測(cè)序數(shù)據(jù),，為客戶提供N端結(jié)構(gòu)驗(yàn)證 + 全長(zhǎng)dànbáizhì測(cè)序的整合解決方案，適配科研藥物研發(fā)需求,。如果您正面臨蛋白N端結(jié)構(gòu)驗(yàn)證或標(biāo)簽表達(dá)困擾,，歡迎聯(lián)系百泰派克生物科技，獲取zhuānyè,、快速,、定制化的測(cè)序服務(wù)支持！

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一,、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù),，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析,，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析,，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù),。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì,，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析,。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上先進(jìn)的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液,、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉,，PEC和和糖基化等N端修飾的影響,。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC,，提供定量dànbáizhì組學(xué),、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué),、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù),。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù),，助力微量樣本蛋白組學(xué),、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析,，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法,，適用于分析組織、細(xì)胞,、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高,，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析,，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確,。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析,，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子,，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜,，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量,。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)先進(jìn)，填補(bǔ)技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù),，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題,。可在單細(xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征,，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白,。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制,，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右,，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞,，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq,。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化,，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景,；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向,。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾,；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率,、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量,、DNA合成速率以及蛋白酶活性等,。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的,、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案,。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過(guò)我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析,，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量,。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥,、免疫疾病及傳染病的解決方案,，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五,、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù),，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù),，提供一系列完善的生物藥物分析方案,，從dànbáizhì、多肽,、抗體,、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析,。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù),，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征,，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH,、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過(guò)CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證,，建立了完備的質(zhì)量體系,，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查,，軟件審計(jì)追蹤,，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā),、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行,。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù),；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可,，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué),、多肽組學(xué),、代謝組學(xué)、生物藥物表征,、單細(xì)胞分析,、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等,；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái),，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè),，10000+客戶的選擇,；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

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