如何使用CD光譜分析蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)？全面指南檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

Circular Dichroism（CD）光譜是一種基于手性分子對圓偏振光選擇性吸收的光譜學(xué)技術(shù),，廣泛應(yīng)用于dànbáizhì二級結(jié)構(gòu)的快速定性和定量分析,。相比X射線晶體學(xué)或核磁共振等高分辨方法，CD光譜具有快速,、無需結(jié)晶,、樣品消耗低等顯著優(yōu)勢，特別適用于dànbáizhì結(jié)構(gòu)初篩,、構(gòu)象變化監(jiān)測及dànbáizhì穩(wěn)定性評估,。在本文中，我們將系統(tǒng)梳理如何使用CD光譜技術(shù)分析dànbáizhì二級結(jié)構(gòu),，重點覆蓋實驗原理,、數(shù)據(jù)采集與處理流程、結(jié)構(gòu)估算方法及其應(yīng)用場景,。

一,、CD光譜技術(shù)原理：識別α-螺旋與β-折疊的“光學(xué)指紋"

CD光譜利用圓偏振光在不同波長下與手性分子間的差異吸收，生成特征性光譜信號,。對dànbáizhì而言,，其主鏈酰胺基團在190–250 nm的遠紫外區(qū)域展示出與二級結(jié)構(gòu)密切相關(guān)的信號模式,。

具體來說：

• α-螺旋結(jié)構(gòu)顯示出208 nm與222 nm處的雙負吸收峰；

• β-折疊結(jié)構(gòu)在218 nm附近具有負峰,，而195 nm附近為正峰,；

• 無規(guī)卷曲（Random Coil）則通常在198 nm附近呈負峰，且整體信號較弱,。

這些光譜“指紋"可用于反演計算dànbáizhì溶液中不同二級結(jié)構(gòu)的比例,。

二、實驗準(zhǔn)備與數(shù)據(jù)采集：確保信號質(zhì)量的關(guān)鍵步驟

要獲得可靠的CD光譜結(jié)果,，實驗設(shè)計與樣品準(zhǔn)備需特別注意以下幾個方面：

1,、緩沖體系選擇

應(yīng)避免使用強紫外吸收的組分，如Tris,、DTT,、高濃度鹽等。推薦使用10 mM PBS,、磷酸緩沖液或硼酸緩沖液,，pH 6.5–8.0 范圍內(nèi)為佳。

2,、dànbáizhì濃度與石英池選擇

遠紫外CD測量對樣品濃度要求較高,，一般建議：

• 使用0.1–0.2 mm光程的石英比色皿；

• dànbáizhì濃度在0.1–0.5 mg/mL之間,，具體依據(jù)分子量與信號強度優(yōu)化,。

3、掃描參數(shù)設(shè)置

• 波長范圍：190–260 nm,；

• 掃描速度：50–100 nm/min,；

• 數(shù)據(jù)積分時間：1–2秒/點；

• 平滑次數(shù)：建議重復(fù)掃描3次以上取平均,，以降低噪聲,。

三、數(shù)據(jù)分析：從原始光譜到結(jié)構(gòu)比例的估算

CD光譜數(shù)據(jù)通常以橢圓度（mdeg）或摩爾橢圓度（[θ]）表示,。結(jié)構(gòu)估算流程如下：

1,、數(shù)據(jù)處理

• 背景扣除（緩沖液信號）；

• 單位轉(zhuǎn)換為摩爾橢圓度,，使用以下公式：

[θ] = (mdeg × 100) / (C × l × n)

其中：

• mdeg為測得的原始橢圓度（單位：毫度,，millidegree）；

• C為蛋白濃度（單位：mol/L）,；

• l為光程長度（單位：cm）,；

• n為肽鍵數(shù)（近似為氨基酸殘基數(shù)）。

2,、二級結(jié)構(gòu)含量擬合

常用的擬合算法包括：

• CONTIN：適用于多種構(gòu)象混合的蛋白；

• SELCON3：對已知結(jié)構(gòu)參考庫依賴性較高；

• CDSSTR：兼顧不同蛋白類型的適用性與靈敏度,。

這些算法可通過在線工具或?qū)Ｓ密浖瓿蓴M合,，輸出α-螺旋、β-折疊,、無規(guī)卷曲等結(jié)構(gòu)比例估計值,。

四、CD光譜的典型應(yīng)用場景：從基礎(chǔ)研究到藥物開發(fā)

CD光譜不僅能用于靜態(tài)結(jié)構(gòu)分析,，也能追蹤動態(tài)過程,，為多種科研與應(yīng)用場景提供結(jié)構(gòu)依據(jù)：

1、dànbáizhì折疊與熱穩(wěn)定性評估

通過變溫掃描（例如20–90°C）,，可繪制橢圓度隨溫度變化的曲線,，從而得到熔點（Tm）與構(gòu)象轉(zhuǎn)變過程。

2,、蛋白-配體/蛋白-蛋白相互作用分析

配體結(jié)合常導(dǎo)致蛋白構(gòu)象變化,，CD光譜能快速捕捉這種結(jié)構(gòu)偏移，有助于推測結(jié)合位點或機制,。

3,、蛋白工程與突變體篩選

比較突變體與野生型蛋白的二級結(jié)構(gòu)，可初步判斷突變對蛋白構(gòu)象的影響,，輔助定向進化實驗設(shè)計,。

五、如何提升CD光譜實驗的穩(wěn)定性與解析力,？

為了zuì大程度發(fā)揮CD光譜的效能,，建議從以下幾個方面著手優(yōu)化：

• 選擇高質(zhì)量樣品，確保蛋白單體均一,、無沉淀,；

• 合理設(shè)計緩沖體系，控制pH,、離子強度及紫外背景,；

• 配合其他結(jié)構(gòu)分析技術(shù)，如dànbáizhì質(zhì)譜,、紅外光譜,、差示掃描量熱等。

CD光譜作為一種經(jīng)典的結(jié)構(gòu)生物學(xué)工具,，至今仍在dànbáizhì結(jié)構(gòu)初篩,、構(gòu)象研究及穩(wěn)定性評估等領(lǐng)域發(fā)揮著bùkětìdài的作用。它簡潔,、高效,、成本低的特點,，使其成為實驗室日常結(jié)構(gòu)分析的shǒuxuǎn方法之一。百泰派克生物科技結(jié)合CD光譜與蛋白組學(xué),、穩(wěn)定性分析平臺,，構(gòu)建了適用于科研和生物醫(yī)藥開發(fā)的系統(tǒng)性蛋白結(jié)構(gòu)研究解決方案。歡迎聯(lián)系我們獲取更多定制化支持,！

百泰派克生物科技特色項目

一,、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù),，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析,，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù),。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務(wù),，對蛋白序列進行分析,。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉,，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二,、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC,，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué),、多肽組學(xué),、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外,，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù),，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作,。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析,，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織,、細胞,、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實驗結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測較低豐度蛋白,，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析,，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三,、單細胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進行單細胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析,，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細胞表面和內(nèi)部的分子,，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質(zhì)量譜,，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細胞表面和內(nèi)部的信號分子表達量,。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.技術(shù)優(yōu)良,，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù),，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題?？稍趩渭毎麑用嫔蠈Χ喾N指標(biāo)同時進行表征,，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大,，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制,，所有樣本細胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞,，實現(xiàn)了數(shù)量級的提高,，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細胞亞群的變化,，在臨床診斷,、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會有新應(yīng)用方向,。除常規(guī)蛋白外,，質(zhì)譜流式細胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率,、細胞大小,、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等,。

四,、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案,。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別,。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺進行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復(fù)的識別和定量,。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究,，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,，深入挖掘未知的靶標(biāo),。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù),，MALDI TOF,，高效色譜分離技術(shù),，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì,、多肽,、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析,，到產(chǎn)品變異性和純度分析,。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì),。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務(wù),。公司實驗室遵循NMPA,、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則,，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證,，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份,，設(shè)備定期計量/期間核查,，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù),，支持新藥研發(fā),、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系,，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù),；

2.獲國家CNAS實驗室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù),；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué),、多肽組學(xué)、代謝組學(xué),、生物藥物表征,、單細胞分析、單細胞質(zhì)譜流式,、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等,；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺，滿足您一站式服務(wù)需求,；

5.服務(wù)3000+企業(yè),，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

如何使用CD光譜分析蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)？全面指南檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹