蛋白質(zhì)測(cè)序：技術(shù)方法和應(yīng)用檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

dànbáizhì是細(xì)胞活動(dòng)的執(zhí)行者,，其功能取決于jīngquè的氨基酸序列,。一旦序列發(fā)生改變，蛋白的結(jié)構(gòu),、相互作用和生物學(xué)功能都可能受到顯著影響,。dànbáizhì測(cè)序（Protein Sequencing）不僅有助于解析蛋白功能機(jī)制，更在疾病研究,、抗體開(kāi)發(fā),、新藥靶點(diǎn)篩選等方面發(fā)揮著基礎(chǔ)性作用。自20世紀(jì)中期以來(lái),，dànbáizhì測(cè)序技術(shù)不斷進(jìn)化,，從Edman降解法走向高通量質(zhì)譜平臺(tái)，覆蓋能力與數(shù)據(jù)精度顯著提升，正逐漸成為現(xiàn)代dànbáizhì組學(xué)研究的核心手段,。

一,、dànbáizhì測(cè)序的主流技術(shù)方法

1、Edman降解

Edman降解是一種順序性地從N-末端逐個(gè)切割氨基酸的化學(xué)測(cè)序法,，適用于小肽或純化蛋白,。反應(yīng)原理是利用苯異硫氰酸（PITC）選擇性標(biāo)記并釋放N端氨基酸殘基，然后通過(guò)色譜手段進(jìn)行鑒定,。

??技術(shù)優(yōu)點(diǎn)：

• 高精度

• 單一序列解析,，適合dànbáizhìN端驗(yàn)證

??主要局限：

• 不能處理復(fù)雜混合樣本

• jǐnxiàn于N端分析，無(wú)法揭示翻譯后修飾

• 通量低,，已不適合大規(guī)模蛋白組研究

盡管在高通量質(zhì)譜出現(xiàn)后應(yīng)用大幅減少,，Edman降解仍被用于某些N端封閉驗(yàn)證或重組蛋白鑒定場(chǎng)景中。

2,、質(zhì)譜法

當(dāng)前dànbáizhì測(cè)序主要依賴質(zhì)譜法（Mass Spectrometry, MS）,，通過(guò)對(duì)蛋白樣本進(jìn)行酶解后，在高分辨質(zhì)譜平臺(tái)上分析其肽段碎片譜圖,，推斷出蛋白的一級(jí)結(jié)構(gòu)信息,。

??常用質(zhì)譜測(cè)序策略：

（1）基于數(shù)據(jù)庫(kù)的測(cè)序（Database-dependent sequencing）

這是通過(guò)將MS/MS譜圖與已知蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)中理論肽段匹配，從而確定蛋白序列的方法,。

?流程特點(diǎn)：

• 高效,、自動(dòng)化程度高

• 依賴高質(zhì)量數(shù)據(jù)庫(kù)（如UniProt、NR,、Swiss-Prot）

• 可結(jié)合肽段定量（如TMT/iTRAQ）

常用算法工具包括：Mascot,、Sequest、MaxQuant,、Proteome Discoverer,。

（2）De novo測(cè)序（無(wú)數(shù)據(jù)庫(kù)依賴）

當(dāng)研究對(duì)象缺乏可靠參考數(shù)據(jù)庫(kù)，或希望發(fā)現(xiàn)未知突變,、變異肽段時(shí),，de novo測(cè)序成為shǒuxuǎn方法。該方法直接從MS/MS譜圖推斷氨基酸序列,，不依賴已有數(shù)據(jù)庫(kù)。當(dāng)前主流的de novo工具包括：PEAKS,、Novor,、pNovo、DeepNovo等,。

（3）頂端下游整合策略（Top-down vs. Bottom-up）

質(zhì)譜測(cè)序常按分析方式分為：

• Bottom-up（自下而上）：將蛋白酶解成肽段后進(jìn)行質(zhì)譜分析,，是目前zuì主流方式。優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高、通量大,，適合復(fù)雜樣本,。

• Top-down（自上而下）：直接分析完整蛋白分子的質(zhì)譜行為，可提供更豐富的結(jié)構(gòu)修飾信息,，但對(duì)儀器分辨率要求更高,，適用于結(jié)構(gòu)蛋白、變體蛋白等,。

二,、dànbáizhì測(cè)序的應(yīng)用場(chǎng)景

1、生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)

通過(guò)比較不同狀態(tài)（如健康與疾病,、處理組與對(duì)照組）樣本中dànbáizhì序列的變化,，可識(shí)別出疾病相關(guān)突變肽段、新抗原,、剪接變體等潛在生物標(biāo)志物,。

2、疾病機(jī)制研究

dànbáizhì序列的變異或翻譯后修飾是多種疾病發(fā)生發(fā)展的核心因素,。通過(guò)dànbáizhì測(cè)序可揭示：

• 激酶調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的磷酸化位點(diǎn)

• 組蛋白修飾（乙?；⒓谆┡c基因表達(dá)關(guān)系

• RNA剪接變異引發(fā)的結(jié)構(gòu)功能異常

3,、抗體測(cè)序與生物藥開(kāi)發(fā)

dànbáizhì測(cè)序在抗體類生物藥研發(fā)中扮演關(guān)鍵角色,，主要應(yīng)用于：

• 抗體序列確認(rèn)（重鏈/輕鏈識(shí)別）

• 穩(wěn)定性分析（序列微差識(shí)別、點(diǎn)突變檢測(cè)）

• 雜質(zhì)蛋白檢測(cè)（免疫原性控制）

4,、非模式生物和新物種研究

對(duì)于缺乏基因組信息的非模式生物,，質(zhì)譜結(jié)合de novo測(cè)序可直接獲取關(guān)鍵蛋白序列信息。典型應(yīng)用包括：

• 農(nóng)業(yè)生物種質(zhì)資源篩選

• 海洋生物功能蛋白發(fā)掘

• 昆蟲(chóng),、微生物天然產(chǎn)物酶活研究

5,、PTM位點(diǎn)識(shí)別與功能研究

翻譯后修飾（Post-Translational Modifications）是調(diào)控蛋白功能的核心機(jī)制。常見(jiàn)修飾包括：

• 磷酸化（Phosphorylation）

• 乙?；ˋcetylation）

• 泛素化（Ubiquitination）

• 糖基化（Glycosylation）

通過(guò)特異富集策略結(jié)合質(zhì)譜測(cè)序,，研究者可在全蛋白水平上定位修飾位點(diǎn)、定量修飾程度,，從而揭示復(fù)雜調(diào)控網(wǎng)絡(luò),。

dànbáizhì測(cè)序作為連接基因信息與蛋白功能的橋梁，了解其包含的技術(shù)方法和應(yīng)用領(lǐng)域是bìbùkěshǎo的,。百泰派克生物科技致力于打造“從樣本到數(shù)據(jù)"的一站式蛋白測(cè)序解決方案,，依托優(yōu)良儀器平臺(tái)與經(jīng)驗(yàn)豐富的質(zhì)譜團(tuán)隊(duì)，為科研與產(chǎn)業(yè)客戶提供高質(zhì)量,、可溯源的測(cè)序服務(wù),，助力每一個(gè)生物發(fā)現(xiàn)更進(jìn)一步,。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析,，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù),，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù,，Cduāncèxù和全序列分析,，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì,，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù),，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液,、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響,。

二,、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué),、靶向dànbáizhì組學(xué),、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù),。此外,，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué),、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作,。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法,，適用于分析組織,、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高,，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白,，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確,。

三,、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子,，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞,，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量,。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)優(yōu)良,，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問(wèn)題,?？稍趩渭?xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白,。

2.分析數(shù)量大,，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右,，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞,，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq,。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化,，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景,；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向,。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾,；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率,、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量,、DNA合成速率以及蛋白酶活性等,。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的,、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案,。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過(guò)我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析,，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量,。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥,、免疫疾病及傳染病的解決方案,，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五,、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù),，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù),，提供一系列完善的生物藥物分析方案,，從dànbáizhì、多肽,、抗體,、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析,，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù),，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì),。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù),。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA,、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則,，通過(guò)CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證,，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份,，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查,，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù),，支持新藥研發(fā),、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系,，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù),；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù),；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué),、多肽組學(xué)、代謝組學(xué),、生物藥物表征,、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式,、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等,；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求,；

5.服務(wù)3000+企業(yè),，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

蛋白質(zhì)測(cè)序：技術(shù)方法和應(yīng)用檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹