基于標(biāo)簽的蛋白質(zhì)定量技術(shù)-iTRAQ，TMT,，SILAC檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

細(xì)胞中dànbáizhì組豐度的動(dòng)態(tài)變化對(duì)各種生命過程都有重要影響,。例如，許多疾病的發(fā)生和發(fā)展通常伴隨著某些dànbáizhì的異常表達(dá),。定量dànbáizhì組學(xué)是對(duì)一個(gè)基因組中表達(dá)的所有dànbáizhì或一個(gè)復(fù)雜混合系統(tǒng)中的所有dànbáizhì進(jìn)行準(zhǔn)確的定量和鑒定,。目前，定量dànbáizhì組學(xué)技術(shù)主要分為標(biāo)記策略和非標(biāo)記策略,，其中標(biāo)記策略分為體內(nèi)標(biāo)記（如SILAC）和體外標(biāo)記（如iTRAQ,，TMT）。

iTRAQ是AB SCIEX公司于2004年開發(fā)的一種定量dànbáizhì組學(xué)研究技術(shù),。該技術(shù)可以比較許多不同樣品中的dànbáizhì,。例如，它可以研究不同病理?xiàng)l件或不同發(fā)育階段的組織樣品中dànbáizhì表達(dá)水平的差異,。同時(shí),，iTRAQ可以準(zhǔn)確地定量和鑒定一個(gè)基因組中表達(dá)的所有dànbáizhì或一個(gè)復(fù)雜混合系統(tǒng)中的所有dànbáizhì。iTRAQ可以使用8種不同的同位素試劑同時(shí)標(biāo)記和比較8種不同的dànbáizhì樣品,。標(biāo)記試劑由報(bào)告基團(tuán),，平衡基團(tuán)和胺特異性反應(yīng)基團(tuán)組成。

iTRAQ的工作流程

iTRAQ技術(shù)的一般過程如下圖所示,。簡(jiǎn)要地說,，樣品被yídànbáiméi裂解后，被烷基化并酶消化成肽段,。用iTRAQ試劑的標(biāo)記標(biāo)簽對(duì)產(chǎn)生的肽段進(jìn)行差異標(biāo)記,，然后將標(biāo)記的樣品混合在一起進(jìn)行LC-MS/MS分析。

iTRAQ的優(yōu)勢(shì) 1. 在一次實(shí)驗(yàn)中，iTRAQ可以同時(shí)標(biāo)記4至8個(gè)樣品,。操作簡(jiǎn)單快捷,。適用于多個(gè)樣品的高通量檢測(cè),，并且實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)更加靈活； 2. iTRAQ是在肽段水平上進(jìn)行的體外標(biāo)記,，適用于許多類型的生物樣品,； 3. iTRAQ具有重復(fù)性好、靈敏度高的特點(diǎn),，可以同時(shí)進(jìn)行定性和定量,。

TMT是美國(guó)Thermo Fisher Scientific開發(fā)的一種肽體外標(biāo)記技術(shù)。該技術(shù)zuì多可以使用10個(gè)同位素標(biāo)簽來標(biāo)記多肽的氨基,。經(jīng)過LC-MS/MS分析后,，可以同時(shí)比較10個(gè)不同樣品中dànbáizhì的相對(duì)含量。TMT廣泛用于疾病標(biāo)志物篩選,、藥物作用靶標(biāo),、動(dòng)植物抗病或抗逆機(jī)制、動(dòng)植物發(fā)育和分化機(jī)制等領(lǐng)域,。

TMT的工作流程

TMT的一般過程如下圖所示,。將不同的dànbáizhì樣品變性、還原,、烷基化并消化成肽段樣品。然后將這些肽段樣品用TMT試劑盒標(biāo)記后合并為一個(gè)樣品,。使用HPRP液相色譜分離合并的樣品,，并將餾分串聯(lián)為12個(gè)樣品。純化后,，通過HPLC-MS分析每個(gè)樣品,。分析數(shù)據(jù)以獲得dànbáizhì的定性和相對(duì)定量信息。

TMT的優(yōu)勢(shì) 1. 高靈敏度：可以檢測(cè)低豐度的dànbáizhì,； 2. 分離能力強(qiáng)：可以分離酸/堿蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白,、不溶性蛋白等,； 3. 應(yīng)用范圍廣：可以鑒定任何類型的dànbáizhì，包括膜dànbáizhì,、核dànbáizhì和胞外dànbáizhì,； 4. 高通量：可以同時(shí)分析10個(gè)樣品，特別適合對(duì)采用多種處理方法或多種處理時(shí)間的樣品進(jìn)行差異dànbáizhì分析,。

SILAC是用于高通量定量dànbáizhì組學(xué)的有效方案,，它是根據(jù)依賴于必需氨基酸的哺乳動(dòng)物細(xì)胞增殖的原理設(shè)計(jì)的。SILAC用于定量dànbáizhì組學(xué)研究,，可以分析細(xì)胞中的dànbáizhì相互作用和dànbáizhì表達(dá)差異,，為復(fù)雜的哺乳動(dòng)物細(xì)胞dànbáizhì組學(xué)的全面系統(tǒng)的定性和定量分析提供有效的解決方案,。

SILAC的工作流程

SILAC的一般過程如下圖所示。向細(xì)胞培養(yǎng)基中添加輕,、中或重穩(wěn)定同位素標(biāo)記的必需氨基酸（主要是賴氨酸和jīngānsuān）,，通過細(xì)胞的正常代謝，所有新合成的dànbáizhì都被標(biāo)有穩(wěn)定同位素,。等量混合所有類型的dànbáizhì,，通過SDS-PAGE分離、切膠和酶消化后,，用LC-MS/MS分析可以獲得相關(guān)dànbáizhì的定量和定性結(jié)果,。

SILAC的優(yōu)勢(shì) 1. SILAC是一種活細(xì)胞水平的標(biāo)記技術(shù),。標(biāo)記效果穩(wěn)定有效,，標(biāo)記效率不受裂解液的影響。 2. SILAC需要的樣品更少,，通常每個(gè)樣品僅幾十微克的dànbáizhì就足夠了,。 3. SILAC使用質(zhì)譜法同時(shí)鑒定和定量多種dànbáizhì。 4. SILAC使用體內(nèi)標(biāo)記技術(shù),，接近樣品的真實(shí)狀態(tài),。

參考文獻(xiàn) 1. Zieske Lynn R. A perspective on the use of iTRAQ reagent technology for protein complex and profiling studies. Journal of Experimental Botany, 2006, 57(7):1501-1508. 2. Lichao Zhang, Joshua E. Elias. Relative Protein Quantification Using Tandem Mass Tag Mass Spectrometry. Methods in Molecular Biology, 2017, 1550:185. 3. Esthelle Hoedt, Guoan Zhang, Thomas A. Neubert. Stable Isotope Labeling by Amino Acids in Cell Culture (SILAC) for Quantitative Proteomics. Adv Exp Med Biol. 2014, 806:93-106.

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析,，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù),，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，N端測(cè)序,，C端測(cè)序和全序列分析,，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì,，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù),，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上先進(jìn)的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液,、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響,。

二,、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué),、靶向dànbáizhì組學(xué),、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù),。此外,，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù),，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作,。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析,，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織,、細(xì)胞,、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白,，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析,，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三,、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析,，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞,，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜,，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)先進(jìn),，填補(bǔ)技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù),，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題?？稍趩渭?xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征,，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大,，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右,，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞,，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq,。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化,，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景,；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向,。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾,；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率,、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量,、DNA合成速率以及蛋白酶活性等,。

四,、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案,。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別,。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量,。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究,，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,，深入挖掘未知的靶標(biāo),。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù),，MALDI TOF,，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案,，從dànbáizhì,、多肽、抗體,、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析,，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù),，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì),。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征,，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù),。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH,、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則,，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系,，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份,，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤,，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù),，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行,。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系,，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù)；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù),；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué),、多肽組學(xué)、代謝組學(xué),、生物藥物表征,、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式,、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等,；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求,；

5.服務(wù)3000+企業(yè),，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

基于標(biāo)簽的蛋白質(zhì)定量技術(shù)-iTRAQ,，TMT,，SILAC檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹