規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容：微量法：過氧化物酶（POD）測(cè)試盒 活性檢測(cè)

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存,；

試劑一：液體 20mL×1 瓶,，4℃保存；

試劑二：液體 0.2mL×1 瓶,，4℃保存,；用時(shí)加入 3mL 試劑一，現(xiàn)配現(xiàn)用,，可 4℃保存一周,；

試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存,。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器,、微量玻璃比色皿/96 孔板,、研缽、冰和蒸餾水

操作步驟：

一,、粗酶液提?。?/p>

1、細(xì)菌,、細(xì)胞或組織樣品的制備

收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清；按照每 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率 20％,，超聲 3s，間隔 10s,，重復(fù) 30 次）,；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè),。

稱取約 0.1g 組織,，加入 1mL 提取液進(jìn)行冰浴勻漿；8000g 4℃離心 10min,，取上清,，置冰上待測(cè)。

2,、血清（漿）樣品：直接檢測(cè),。二、測(cè)定步驟：

1,、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 470nm，蒸餾水調(diào)零,。

2,、 測(cè)定前將試劑一、二和三在 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）放置 10min 以上,。

3,、 樣本測(cè)定表

在 EP 管中按順序加入上述試劑，立即混勻并計(jì)時(shí),，立即取 200µL 轉(zhuǎn)移至微量玻璃比色皿或 96

孔板中,，記錄 470nm 下 30s 時(shí)的吸光值 A1 和 1min30s 后的吸光值 A2。計(jì)算?A＝A2-A1,。

POD 活性計(jì)算：

用微量玻璃比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

1,、按血清（漿）體積計(jì)算

單位定義：每 mL 血清（漿）在每 mL 反應(yīng)體系中每分鐘 A470 變化 0.01 定義為一個(gè)酶活力單位。POD（U/mL）＝?A÷0.01×V 反總÷V 樣÷T =4900×?A

2,、按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每 mg 組織蛋白在每 mL 反應(yīng)體系中每分鐘 A470 變化 0.01 定義為一個(gè)酶活力單位,。POD（U/mg prot）＝?A÷0.01×V 反總÷（Cpr×V 樣）÷T =4900×?A÷Cpr

3、按樣本鮮重計(jì)算

單位定義：每 g 組織在每 mL 反應(yīng)體系中每分鐘 A470 變化 0.01 定義為一個(gè)酶活力單位,。POD（U/g 鮮重）＝?A÷0.01×V 反總÷（W÷V 樣總×V 樣）÷T =4900×?A÷W

4,、按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

單位定義:每 1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每 mL 反應(yīng)體系中每分鐘 A470 變化 0.01 定義為一個(gè)酶活力單位。POD（U/104 cell）＝?A÷0.01×V 反總÷（500÷V 樣總×V 樣）÷T =9.8×?A

用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

1,、按血清（漿）體積計(jì)算

單位定義：每 mL 血清（漿）在每 mL 反應(yīng)體系中每分鐘 A470 變化 0.005 定義為一個(gè)酶活力單位,。POD（U/mL）＝?A÷0.005×V 反總÷V 樣÷T =9800×?A

2、按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每 mg 組織蛋白在每 mL 反應(yīng)體系中每分鐘 A470 變化 0.005 定義為一個(gè)酶活力單位,。POD（U/mg prot）＝?A÷0.005×V 反總÷（Cpr×V 樣）÷T =9800×?A÷Cpr

3,、按樣本鮮重計(jì)算

單位定義：每 g 組織在每 mL 反應(yīng)體系中每分鐘 A470 變化 0.005 定義為一個(gè)酶活力單位。POD（U/g 鮮重）＝?A÷0.005×V 反總÷（W÷V 樣總×V 樣）÷T =9800×?A÷W

4,、按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

單位定義：每 1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每mL 反應(yīng)體系中每分鐘A470 變化 0.005 定義為一個(gè)酶活力單位,。POD（U/104 cell）＝?A÷0.005×V 反總÷（500÷V 樣總×V 樣）÷T =19.6×?A

V 反總：反應(yīng)體系總體積,，0.245mL；V 樣：加入樣本體積,，0.005mL,；V 樣總：加入提取液體積，1 mL,；T：反應(yīng)時(shí)間,，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；W：樣本鮮重，g,；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),，500 萬。

微量法：過氧化物酶（POD）測(cè)試盒 活性檢測(cè)注意事項(xiàng)：

1,、 如一次測(cè)定的樣本數(shù)量較多，可將試劑一,、二,、三和蒸餾水按照比例混合，在 37℃（哺乳動(dòng)物） 或 25℃（其它物種）放置 10min,，測(cè)定時(shí)加入 240µL 即可,。

2、 樣本測(cè)定值如果小于 0.005,，可將反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)到 3-5 分鐘,，計(jì)算時(shí)除以反應(yīng)時(shí)間即可；如果高于 0.5,，可將樣本用提取液進(jìn)行稀釋,。計(jì)算時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可。