檢測原理: 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被豬柯薩奇病毒Ⅲ型抗原的包被微孔中,，依次加入標(biāo)本,、HRP標(biāo)記的檢測抗原，經(jīng)過溫育并洗滌,。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值）,，與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中豬柯薩奇病毒Ⅲ型（CoxV III）的存在與否,。

豬柯薩奇病毒Ⅲ型(CoxV III)ELISA試劑盒組成：

結(jié)果判斷

 1.  試驗有效性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00,；

                陰性對照孔OD值平均值≤0.15。

2.  臨界值（Cut off）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

3.  陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off）,，樣品為陰性

4.  陽性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off）,，樣品為陽性

豬柯薩奇病毒Ⅲ型(CoxV III)ELISA試劑盒性能：

1.  準(zhǔn)確性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00；陰性對照孔OD值平均值≤0.15,，說明試驗結(jié)果有效,。

2.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

3.  重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于15%,。

4.  貯藏：2-8℃，避光防潮保存,。

實驗注意事項：

1）待檢樣品要澄清,，否則會影響結(jié)果。
2）要保證移液槍的準(zhǔn)確性,，誤差不能超過2%,。可用水和電子天平進(jìn)行確定,。

3）要配備20ul,、50ul,、100ul、1000ul和排槍各一支,。吸取不同的液體后,，要更換槍頭；吸取液體時,，要用量程和需要量接近的槍去吸,，減少誤差；用槍吸取液體時速度不能太快,，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確,。

4）實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復(fù)到室溫,，以使結(jié)果更穩(wěn)定,。檢測前，要打開酶標(biāo)儀,，使之穩(wěn)定10分鐘以上,。

5）實驗時，要使底物避光保存,；底物是光敏感的,，要在臨用前現(xiàn)配；底物有一定的毒性,，終止液對皮膚有腐蝕性,，應(yīng)盡量避免接觸。

6）將液體加到酶標(biāo)孔中時,，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去,。液體全部加完后,，可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體,。也可以用酶標(biāo)儀的晃動功能,。

7）溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板,，防止水分的蒸發(fā),。溫浴時間應(yīng)遵守試劑盒規(guī)定。
8）洗板時,，每次洗液加入后,，應(yīng)靜置1分鐘。沒有洗板機(jī)時，倒去液體后,，要將酶標(biāo)板在報紙或毛紙上用力拍干。
9）洗液不夠時,，可用蒸餾水自行配制PH7.4,，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液,。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存,。
10）應(yīng)盡量做雙孔實驗，這樣才能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性,。對結(jié)果有疑問的樣品要用其它方法進(jìn)行確證,。