檢測(cè)原理: 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,。往預(yù)先包被豬柯薩奇病毒Ⅲ型抗原的包被微孔中,，依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗原,，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌,。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較,，從而判定標(biāo)本中豬柯薩奇病毒Ⅲ型（CoxV III）的存在與否,。

豬柯薩奇病毒Ⅲ型(CoxV III)ELISA試劑盒組成：

結(jié)果判斷

 1.  試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00；

                陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15,。

2.  臨界值（Cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

3.  陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off）,，樣品為陰性

4.  陽(yáng)性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off），樣品為陽(yáng)性

豬柯薩奇病毒Ⅲ型(CoxV III)ELISA試劑盒性能：

1.  準(zhǔn)確性：陽(yáng)性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00,；陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15,，說(shuō)明試驗(yàn)結(jié)果有效。

2.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng),。

3.  重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于15%。

4.  貯藏：2-8℃,，避光防潮保存,。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：

1）待檢樣品要澄清，否則會(huì)影響結(jié)果,。
2）要保證移液槍的準(zhǔn)確性,，誤差不能超過(guò)2%,。可用水和電子天平進(jìn)行確定,。

3）要配備20ul,、50ul、100ul,、1000ul和排槍各一支,。吸取不同的液體后，要更換槍頭,；吸取液體時(shí),，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差,；用槍吸取液體時(shí)速度不能太快,，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。

4）實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出,，使各種試劑都恢復(fù)到室溫,，以使結(jié)果更穩(wěn)定。檢測(cè)前,，要打開(kāi)酶標(biāo)儀,，使之穩(wěn)定10分鐘以上。

5）實(shí)驗(yàn)時(shí),，要使底物避光保存,；底物是光敏感的，要在臨用前現(xiàn)配,；底物有一定的毒性,，終止液對(duì)皮膚有腐蝕性，應(yīng)盡量避免接觸,。

6）將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí),，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,，液滴會(huì)自然流下去,。液體全部加完后，可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒,，混勻液體,。也可以用酶標(biāo)儀的晃動(dòng)功能。

7）溫浴時(shí),，要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板,，防止水分的蒸發(fā)。溫浴時(shí)間應(yīng)遵守試劑盒規(guī)定,。
8）洗板時(shí),，每次洗液加入后，應(yīng)靜置1分鐘,。沒(méi)有洗板機(jī)時(shí),，倒去液體后，要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干,。
9）洗液不夠時(shí),，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液,，加入0.1%的吐溫20作為洗液,。加入1/1000的疊氮鈉后可長(zhǎng)期保存。
10）應(yīng)盡量做雙孔實(shí)驗(yàn),，這樣才能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性,。對(duì)結(jié)果有疑問(wèn)的樣品要用其它方法進(jìn)行確證。