【產(chǎn)品用途】：本試劑盒僅供科研使用，定量檢測(cè)細(xì)胞液,、體液,、組織、血清,、血漿等標(biāo)本中大鼠P選擇素(P-Selectin)的含量,。凡訂購(gòu)我司任意一款試劑盒均享受免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，歡迎咨詢(xún),、訂購(gòu),！

【P選擇素(P-Selectin)簡(jiǎn)介】：是相對(duì)分子質(zhì)量為140000的糖蛋白，存在于血管內(nèi)皮細(xì)胞的Weibe-l Palade 小體膜上及血小板α顆粒膜上,，在受到組織胺,、凝血mei、佛波酯和鈣離子載體的刺激后,，其迅速在質(zhì)膜上表達(dá),， 缺氧/再氧化或氧自由基也可誘導(dǎo)表達(dá)。P選擇素凝集素樣區(qū)是配體結(jié)合部位的關(guān)鍵序列,，其配體是唾液酸化路易斯( S-Lewis x ) , 高親和力的配體是P選擇素糖蛋白配體1( P-selectin glycoproteinlig and 1, PSGL-1) , 主要表達(dá)于中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞,。

檢測(cè)原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被P選擇素（P-Selectin）抗體的包被微孔中,，依次加入標(biāo)本,、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌,。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的P選擇素（P-Selectin）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品活性,。

大鼠P選擇素(P-Selectin)ELISA檢測(cè)試劑盒組成：（檢測(cè)范圍請(qǐng)參考說(shuō)明書(shū)）

大鼠P選擇素(P-Selectin)ELISA檢測(cè)試劑盒操作步驟:

【試劑盒平衡至室溫】：從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。

【標(biāo)準(zhǔn)品加樣】：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,。

【加樣】：樣本孔先加待測(cè)樣本 10μL，再加稀釋液40μL,；空白孔不加,。除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體 100μL,。

【溫育】：用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

【洗滌】：棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液，靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5 次（也可用洗板機(jī)洗板）,。

【顯色】：每孔加入底物 A,、B 各 50μL，37℃避光孵育15min,。

【終止,、測(cè)定】：每孔加入終止液 50μL,，15min 內(nèi),，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD 值,。

技術(shù)小提示：

1.當(dāng)混合或重溶蛋白溶液時(shí)，盡量避免起沫,。

2. 為了避免交叉感染,，配置不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品、上樣,、加不同試劑都需要更換槍頭,。另外不同試劑請(qǐng)分別使用不同的移液槽。

3.每次孵育時(shí),，請(qǐng)正確使用封板膠可保證結(jié)果的準(zhǔn)確性,。

4.混合后的顯色底物在上板前應(yīng)為無(wú)色，請(qǐng)避光保存,；假如微孔板后,，將由物色變成不同深度的藍(lán)色,。

5.終止液上板順序應(yīng)同顯色底物上板順序一致；加入終止液后,，孔內(nèi)顏色由藍(lán)變黃,；若孔內(nèi)有綠色，則表明孔內(nèi)液體未混勻,；請(qǐng)充分混合,。