【產(chǎn)品用途】：本試劑盒僅供科研使用,，定量檢測細(xì)胞液、體液,、組織,、血清、血漿等標(biāo)本中大鼠CD41分子(CD41)的含量,。凡訂購我司任意一款試劑盒均享受免費(fèi)代測服務(wù),，歡迎咨詢、訂購,！

檢測原理：大鼠Elisa試劑盒大多采用雙抗體夾心法進(jìn)行測定樣品指標(biāo)水平,，檢測的樣品主要是包括血清,、血漿或者是各種組織液中的固體組織等，用純化的抗體微孔板,，制成固體相抗體,，再依次加入樣品，與所標(biāo)記好的抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)結(jié)合物,，再加相應(yīng)的酶底物進(jìn)行顏色反應(yīng)。最后用酶標(biāo)儀在相應(yīng)的波長下測定該成份的吸光度,，并通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品中的濃度,。與規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)值比較，從而來判定樣品標(biāo)本的特性,。

大鼠CD41分子(CD41)ELISA試劑盒靈敏度高組成：（檢測范圍請參考說明書）

常見樣本處理及要求：

可用于ELISA實(shí)驗(yàn)的樣本一般有血清,、血漿、尿液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液以及組織勻漿等,。不同樣本類型的預(yù)處理方法也不同。

液體樣本處理原則：所有的液體樣本,，用無菌管收集,，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）

【血清樣本】：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置 2 小時或 4℃過夜，然后 1000×g 離心 20 分鐘,，取上清即可,，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

注意事項(xiàng)：收集血液樣本應(yīng)避免溶血,，因?yàn)榧t細(xì)胞在溶解時會釋放具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，這種情況下,，ELISA實(shí)驗(yàn)中將會出現(xiàn)非特異性顯色反應(yīng),，導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確，出現(xiàn)假陽性結(jié)果,。另外,，樣本還應(yīng)避免細(xì)菌污染，因?yàn)榧?xì)菌可能含有內(nèi)源性HRP,，也會導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確,。

【血漿樣本】：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,，取上清即可檢測,，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

注意事項(xiàng)：檢測前請仔細(xì)閱讀ELISA試劑盒說明書,，查看該試劑盒針對抗凝劑是否有特殊要求,。

【組織勻漿】：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果）,，稱重后將組織jian碎,。將jian碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中,，于冰上充分研磨,。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎,，或反復(fù)凍融,。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測,。

大鼠CD41分子(CD41)ELISA試劑盒靈敏度高操作步驟：

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.  樣本孔先加待測樣本10μL,，再加稀釋液40μL,；空白孔不加。

4.  除空白孔外,，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

5.  棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）,。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值,。

技術(shù)小提示：

1. 當(dāng)混合或重溶蛋白溶液時,，盡量避免起沫。

2. 為了避免交叉感染,，配置不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品,、上樣、加不同試劑都需要更換槍頭,。另外不同試劑請分別使用不同的移液槽,。

3.每次孵育時，請正確使用封板膠可保證結(jié)果的準(zhǔn)確性,。

4. 混合后的顯色底物在上板前應(yīng)為無色,，請避光保存；假如微孔板后,，將由物色變成不同深度的藍(lán)色,。

5.終止液上板順序應(yīng)同顯色底物上板順序一致；加入終止液后,，孔內(nèi)顏色由藍(lán)變黃,；若孔內(nèi)有綠色，則表明孔內(nèi)液體未混勻,；請充分混合,。

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