試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,。往預(yù)先包被網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病毒抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本,、HRP標(biāo)記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值）,，與CUTOFF值相比較,，從而判定標(biāo)本中網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病毒（REV）的存在與否。

禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病毒(REV)ELISA檢測試劑盒 有三個(gè)必要的試劑：

【免疫吸附試劑】,、【結(jié)合物】,、【酶的底物】

1）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）

2）酶標(biāo)記的抗原或抗體（結(jié)合物/二抗）

3）酶的底物：A+B

4) 陰性對照品和陽性對照品，參考標(biāo)準(zhǔn)品（一抗）

5）結(jié)合物和標(biāo)本的稀釋液

6）洗滌液（PBST）

操作步驟:

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2.  設(shè)置陰、陽性對照孔和樣本孔,，陰,、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各50μL,；

3.  待測樣本孔先加待測樣本10μL,，再加稀釋液40μL；

4.  隨后陰,、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液，靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.  每孔加入底物A,、B各50μL,，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值。

禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病毒(REV)ELISA檢測試劑盒 結(jié)果判斷

1.  試驗(yàn)有效性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00,；

陰性對照孔OD值平均值≤0.15,。

2.  臨界值（Cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

3.  陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性

4.  陽性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off）,，樣品為陽性