樣品收集、處理及保存方法：斑馬魚雌激素(E)ELISA檢測試劑盒 課題研究

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細胞刺激,，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。

2.  血漿：EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清,。

3.  細胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清,。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測,，請按一次用量分裝，凍存于-20℃,，避免反復凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

檢測原理:試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預先包被雌激素（E）抗體的包被微孔中,，依次加入標本、標準品,、HRP標記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雌激素（E）呈正相關,。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，計算樣品濃度。

斑馬魚雌激素(E)ELISA檢測試劑盒 課題研究試劑盒組成:

注：標準品（S0-S5）濃度依次為：0,、5,、10、20、40,、80 pg/mL

關于ELISA試劑盒操作常見的問題,，上海軒澤康生物一一為您解答：

1. 一次ELISA實驗需要多長時間？

答：雙抗體夾心ELISA法一次實驗需要3,。5-4小時,，競爭ELIA法一次實驗需要2-2.5小時

2. 為什么有的試劑盒是采用競爭ELISA法？

答:小分子抗原或半抗原因為缺乏可作夾心法的兩個以上的位點,，因此不能用雙抗體夾心法進行測定,，可以采用競爭法。其原理是標本中的抗原和固相載體上的抗原競爭生物su化抗體上的結合位點,，標本中抗原量含量愈多,，結合在固相上的生物su化抗體愈少，*的顯色也愈淺,。即顯色深淺與樣本中的抗原濃度成反比,。小分子激素等ELISA測定多用此法。

3. 試劑盒做的結果不理想怎么辦,？

答：實驗結果不理想請及時與客服或技術支持取得聯(lián)系,，我們可以幫助您一起分析實驗結果。如果僅憑實驗數(shù)據(jù)無法判斷,，您可以將試劑盒發(fā)回我們進行售后檢測,。