大鼠FⅤ酶聯(lián)免疫（ELISA）試劑盒（科研實驗專用）操作步驟：步驟一：使用前將所有試劑平衡至室溫并充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫以免加樣時加入大量的氣泡產(chǎn)生加樣上的誤差,。步驟二：根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復孔的盡量做復孔,。步驟三：【加樣】加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi),。立即加入50ul的生物,，素標記的抗體。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻,，37攝氏度溫育45分鐘。步驟四：【洗滌】甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液振蕩30秒,，甩去洗滌液用吸水紙拍干。重復此操作4次,，也可以用洗板機洗滌,。步驟五：每孔加入100ul的HRP輕輕振蕩混勻37攝氏度溫育30分鐘。步驟六：重復洗滌步驟,。步驟七：每孔加入底物A,、B溶液各50ul，輕輕振蕩混勻,，37攝氏度溫育5分鐘,，避免光照。步驟八：取出酶標板迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結(jié)果,。步驟九：在450nm波長處測定各孔的OD值,。

備注：1. （96T/48T）打開包裝后請及時檢查所有物品是否齊全。2.標準品（S0-S5）濃度依次為：0,、30,、60、120,、240,、480 pg/ml3. 經(jīng)過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),，實驗過程中直接取 50μL 樣本上樣即可,。當有部分樣本值超過最大標準品濃度時，可用稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗,。

大鼠FⅤ酶聯(lián)免疫（ELISA）試劑盒檢測原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預先包被（FⅤ）抗體的包被微孔中，依次加入標本,、標準品,、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌,。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的（FⅤ）呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度,。

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