大鼠冠狀病毒抗體酶聯(lián)免疫（ELISA）試劑盒組成

樣品收集,、處理及保存方法：

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激,，收集血液后,，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測,，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

大鼠冠狀病毒抗體酶聯(lián)免疫（ELISA）試劑盒性能

1.  準確性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00,；陰性對照孔OD值平均值≤0.15，說明試驗結(jié)果有效,。

2.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng),。

3.  重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%,。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置陰,、陽性對照孔和樣本孔,，陰、陽性對照孔中加入陰性對照,、陽性對照各50μL,；

3.  待測樣本孔加待測樣本50μL；

4.  隨后陰,、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗原100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

5.  棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）,。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值,。

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