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助力維生素B12檢測新國標(biāo)實(shí)施發(fā)布
維生素B12是一類含有咕啉(corrin)環(huán)的類咕啉(corrinoids)化合物,，其通俗名稱又叫做鈷胺素(cobalamin)，是一類含金屬元素的維生素,。維生素B12的化學(xué)結(jié)構(gòu)如下圖所示,，根據(jù)咕啉環(huán)軸向上方的R基不同,，形成了不同類型的維生素B12類物質(zhì),。如羥基（-OH）與咕啉環(huán)中的鈷離子相連形成羥基鈷胺素（hydroxycobalamin）,，同樣,，脫氧腺苷（5'-deoxyadenosyl）,、甲基（-CH3）、氰基（-CN）與鈷離子相連分別生成腺苷鈷胺素（deoxyadenosylcobalamin）,、甲基鈷胺素（methylcobalamin）和氰鈷胺素（cyanocobalamin）,。日常生活中所稱的維生素B12更多是指氰鈷胺素，因其易結(jié)晶,，不易被空氣氧化,，所以常被用作維生素B12的食品添加劑形式。
人體不能合成維生素B12,，主要依靠動(dòng)物性食品提供,，含量豐富者有肝腎組織、肉類,、蛋類和乳類制品等,。此外特殊保健食品、功能性飲料等食品中也會(huì)含有相對(duì)較多的維生素B12,。維生素B12在人體代謝當(dāng)中起到非常重要的作用,，缺乏維生素B12不僅會(huì)導(dǎo)致貧血，還會(huì)引起心臟病,、神經(jīng)紊亂,、生育與出生缺陷以及癌癥等。因此一種或幾種能夠精確檢測食品中維生素B12含量的方法十分重要,。目前常用的主要有比色測定法,、微生物營養(yǎng)缺陷型測定法、酶聯(lián)免疫吸附測定法,、高效液相色譜法以及高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法等方法,。需要考慮的因素有：動(dòng)物性食品中維生素B12同時(shí)有多種存在形式，如何準(zhǔn)確測定其真實(shí)含量,。其次需要將結(jié)合態(tài)維生素B12從鈷胺素結(jié)合蛋白中游離出來,。還有維生素B12在食品中含量較低，如何有效富集等問題,。近期新發(fā)布的國標(biāo)《GB 5009.285-2022食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中維生素B12的測定》給我們提供了合適的解決方案,。
我國現(xiàn)行的國標(biāo)為《GB 5413.14-2010 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中維生素B12的測定》采用的是微生物法，僅適用于嬰幼兒食品,、乳及乳制品中維生素B12的檢測,。國際現(xiàn)行方法也是微生物法，美國 AOAC 986.23方法即采用微生物法測定乳基嬰幼兒配方粉中的維生素B12,。此外AOAC 2011.10方法采用雙柱切換-液相色譜-紫外檢測法測定嬰兒配方奶粉和成人營養(yǎng)品中的維生素B12,。值得一提的是，在2010版國標(biāo)修訂征求意見稿中也曾將固相萃取-在線柱切換高效液相色譜法納入本標(biāo)準(zhǔn),，但未能出現(xiàn)在最新標(biāo)準(zhǔn)中,。
新國標(biāo)2022版第一法為液相色譜法,，適用于嬰幼兒食品、乳及乳制品,、肉及肉制品中維生素B12的測定,。因其檢測設(shè)備和耗材較為廉價(jià)、準(zhǔn)確度較高而值得推廣,。第二法為液相色譜-質(zhì)譜法,，適用于嬰幼兒食品、乳及乳制品,、肉及肉制品,、即食谷物,、烘焙食品,、果凍、飲料中維生素B12測定,。該方法是將分離性能優(yōu)異的液相色譜法與靈敏度更高,、能提供相對(duì)分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)信息的質(zhì)譜法相結(jié)合的現(xiàn)代分離分析技術(shù)，同時(shí)結(jié)合使用我司獨(dú)立研發(fā)維生素B12同位素內(nèi)標(biāo),，能對(duì)維生素B12更加快速,、準(zhǔn)確的定量，而且能解決飲料等低含量樣品的定量檢測難題,。第三法仍為微生物法,，適用于嬰幼兒食品、乳及乳制品中維生素B12的測定,。
通過以上對(duì)比發(fā)現(xiàn),，新國標(biāo)2022版中增加了多種復(fù)雜的樣品基質(zhì)，提高了方法的適用性,，通過使用高特異性的免疫親和柱以及維生素B12同位素內(nèi)標(biāo)解決了當(dāng)前維生素B12分析檢測的難題,。在對(duì)應(yīng)的第一法前處理中，試樣經(jīng)酶解后,，用溶液將鈷胺素異構(gòu)體（羥鈷胺素,、甲鈷胺素和5-脫氧腺苷鈷胺素等轉(zhuǎn)化為氰鈷胺素，樣液通過免疫親和柱凈化,、濃縮后,，反相液相色譜柱分離，紫外檢測器檢測,。
維生素B12及其內(nèi)標(biāo)的液相色譜-質(zhì)譜圖
在對(duì)應(yīng)第二法前處理中,，稱取試樣后要先加入適量的同位素內(nèi)標(biāo)，再按第一法相同操作處理,，最后由質(zhì)譜檢測器分析,，因同位素內(nèi)標(biāo)的使用,，可以有效地校正基質(zhì)效應(yīng)和前處理損失，使結(jié)果更加精確,。
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