1.樣本處理
首先對于ELISA來說,，正確的處理樣本是保證檢測準確性和正確性的第一步,。
正式實驗之前最好使用少量的樣本進行預實驗,，可以選擇2,、5,、10倍稀釋樣本,，選擇合適的稀釋比例進行實驗，親身經(jīng)歷告訴大家,，千萬不能圖省事,，不然濃度太大超過檢測限，簡直就是賠了夫人又折兵?。,。⊥瑫r,，樣本的保存也非常重要,，保存不當或在冰箱里保存過久的樣本，血清中l(wèi)gG可聚合成多聚體,，導致結(jié)果偏高,。建議五天內(nèi)檢測的血清樣本可短暫存放4℃，一周之后測定的血清樣本應該低溫凍存,，同時切忌反復凍融,。如果是血清樣本，也要主要樣本不能有溶血,、脂血和細菌等殘留,，這些樣本中存在非特異性顯色影響結(jié)果。                                                                                                 2.標準品如何使用
標準品的配置一般都是按照說明書進行的倍比稀釋,，很多廠家提供的盒子里標準品是凍干粉,，同時要求每次使用新的凍干標準品，那重復使用是否會有影響呢,？這里我又很有經(jīng)歷的含淚告訴大家,，咨詢過國產(chǎn)D牌的技術(shù)支持,，建議是如果非用不可，那么標準品打開后一定要注意保存,，且盡量不要相隔太久,。我也曾經(jīng)試過，冬天放置一周的標準品,，再次使用差別不大,，但是放太久的標準品建議狠心丟掉，不要使用,。因此小伙伴們設計實驗一定要充分,，盡量備好樣本再進行操作！     3.操作過程需牢記
首先,，實驗進行前要先將試劑盒從冰箱中恢復室溫,。
加樣時盡量將液體加入孔底，不要有氣泡,，提供一個小tip!因為有氣泡會影響吸光度值的測定,，檢測之前可以使用小槍頭很容易戳破氣泡。
洗板時注意不要間隔太久,，盡量避免干板現(xiàn)象,！
按照試劑盒批號和保質(zhì)期使用，不同批次的試劑嚴禁混合使用,，同時試劑盒使用后剩余的孔板一定要和干燥劑一起保存,，防止潮濕。
目的蛋白含量低的樣本可以咨詢廠家是否可以適當延長孵育時間,，使其充分結(jié)合,。（本人使用不同廠家的試劑盒要求是不同的，有需要嚴格按照說明時間進行,，防止非特異性結(jié)合,，因此小伙伴們還是要多咨詢一下！）