雙抗體夾心法
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml,。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃過夜,。次日,，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次,，每次3分鐘,。（簡稱洗滌，下同）,。
2.加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,，置37℃孵育1小時。然后洗滌,。（同時做空白孔,，陰性對照孔及陽性對照孔）。
3.加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml,。37℃孵育0.5～1小時,，洗滌。
4.加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃10～30分鐘,。
5.終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
6.結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應孔內(nèi)顏色越深,，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+”、“-”號表示,。也可測OD值：在ELISA檢測儀上,，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處,，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性,。
間接法
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml,，4℃過夜,；
2.次日洗滌3次；
3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌,；
4.（同時做空白,、陰性及陽性孔對照）于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml,；
5.37℃孵育35-60分鐘,，洗滌；
6.’最后一遍用DDW洗滌,。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4,、5、6,。
