日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

 MYC-Nanoab-Magnetic Beads

貨號：MNM-25-1000

儲存條件：可在4℃保存1年(確保完quan密封)，避免離心，干燥和凍融。

產(chǎn)品描述

偶聯(lián)anti-Myc-tag納米抗體的磁性納米微球用于免疫沉淀Myc-tag (EQKLISEEDL)融合蛋白,。

產(chǎn)品優(yōu)勢

l沒有普通抗體的輕鏈和重鏈,，背景干凈；

l即用型,，節(jié)約時間,；

l高親和力，高載量,。

應(yīng)用范圍

可用于免疫沉淀（IP）/免疫共沉淀（CoIP）,、染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）/RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀（RIP）、酶活性測定,、質(zhì)譜分析等,。

特異性

特異性結(jié)合位于融合蛋白N-端、C-端及內(nèi)部的Myc-tag,。不結(jié)合內(nèi)源性c-Myc,。

產(chǎn)品特性

存儲緩沖液：PBS(含有20%乙醇)。

保存條件：可在4℃保存1年(確保完quan密封),，避免離心,，干燥和凍融。

實驗原理

實驗步驟

收集細(xì)胞
每個免疫沉淀反應(yīng)大約使用 106-107 個表達(dá)Myc-tag融合蛋白的細(xì)胞,，可根據(jù)Myc-tag融合蛋白表達(dá)量適當(dāng)調(diào)整細(xì)胞數(shù),。

吸出培養(yǎng)基，向培養(yǎng)皿中加入預(yù)冷的1×PBS,，漂洗2次,，利用細(xì)胞刮或yi酶消化收集貼壁細(xì)胞，細(xì)胞轉(zhuǎn)移到離心管,，500g離心3分鐘并丟棄上清液,。

植物組織裂解處理：

取適量植物組織樣本（葉片等）放置于冷凍液氮中，之后將冷凍后得植物組織樣本放于研缽進(jìn)行研磨，盡可能充分研磨破壞其細(xì)胞壁,。加入500-1000ul RIPA 裂解液（已加蛋白酶抑制劑 PMSF 等）進(jìn)行裂解,，為了提高裂解效率，加入 200ul 玻璃粉充分震蕩 30min,，裂解完成后 12000 rpm,，離心 30min，吸取上清 置新的離心管中,，棄去沉淀,。

細(xì)胞裂解

1.在裂解緩沖液中加入蛋白酶抑制劑，用500μl預(yù)冷的裂解緩沖液重懸細(xì)胞,。

2.置于冰上30分鐘,，可每10分鐘充分吹打一次。

3.4℃,，20,000g離心15分鐘,，將裂解產(chǎn)物（上清）轉(zhuǎn)移到一個新的預(yù)冷管中，丟棄沉淀,。注意：此時細(xì)胞裂解產(chǎn)物可長期保存于-80℃,。

平衡珠子

4.充分混勻Myc-Nanoab-Magnetic Beads，吸取40μl該產(chǎn)品到500μl預(yù)冷的裂解緩沖液中,，在磁力架上分離磁珠直到上清變成清亮的狀態(tài),，丟棄上清液。（此步驟可選）

結(jié)合蛋白

5.將平衡好的Myc-Nanoab-Magnetic Beads加入到細(xì)胞裂解產(chǎn)物中（如果未做第4步,，可在細(xì)胞裂解產(chǎn)物中直接加入40μl該產(chǎn)品）,，于4℃旋轉(zhuǎn)混合結(jié)合1小時。根據(jù)實驗需要可調(diào)整結(jié)合時間,。如果需要,，留存50μl的裂解產(chǎn)物進(jìn)行免疫印跡分析。

6.在磁力架上分離磁珠直到上清變成清亮的狀態(tài),，丟棄上清液,。如果需要，留存50μl上清液進(jìn)行免疫印跡分析,。

清洗珠子

7.用500μl預(yù)冷的裂解緩沖液中重懸6中的Myc-Nanoab-Magnetic Beads,，在磁力架上分離磁珠直到上清變成清亮的狀態(tài)，丟棄上清液并重復(fù)清洗3次,。盡量減少清洗時間,。

洗脫蛋白

方法一：
8.加入20μl 2×SDS-sample buffer重懸Myc-Nanoab-Magnetic Beads。95℃,，加熱10min充分變性,，在磁力架上進(jìn)行分離,，收集的產(chǎn)物可進(jìn)行SDS-PAGE及免疫印跡分析。

方法二：
9.加入50μl 0.2 M pH2.5的gan氨酸洗脫結(jié)合的蛋白,，孵育時間30秒,，期間不斷混勻，在磁力架上進(jìn)行分離并收集上清,，立即加入5μl 1.0 M Tris（pH10.4）以中和酸性的gan氨酸,。注意：為了提高洗脫效率可以重復(fù)這一步。

方法三：

10.加入40µM Myc-peptide進(jìn)行洗脫,。

可選實驗方案

方案一：
如需進(jìn)行Myc融合酶的活性檢測，無需洗脫,，可以直接檢測,。
方案二：
如需進(jìn)行染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）實驗，主要用于含有Myc融合蛋白的蛋白質(zhì)/DNA相互作用的實驗,。染色質(zhì)免疫沉淀一般包括細(xì)胞固定,，染色質(zhì)斷裂，染色質(zhì)免疫沉淀,，聯(lián)反應(yīng)的逆轉(zhuǎn),，DNA的純化以及DNA的鑒定。其中前期細(xì)胞固定,，染色質(zhì)斷裂不變,；然后接著直接進(jìn)入說明書的第5步，加入細(xì)胞裂解產(chǎn)物后,，DNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物結(jié)合到Myc-Nanoab-Magnetic Beads上,；
進(jìn)入第6和7步，分離得到復(fù)合物,；進(jìn)入第9步,，得到洗脫的復(fù)合物；后期交聯(lián)反應(yīng)的逆轉(zhuǎn),，DNA的純化及DNA的鑒定等同于普通的ChIP實驗,。RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀（RIP）實驗步驟同上。
方案三：
Myc-Nanoab-Magnetic Beads不僅可以用于在體內(nèi)外檢測和驗證蛋白質(zhì)之間的相互作用,，也可以結(jié)合質(zhì)譜分析篩選與已知蛋白相互作用的未知蛋白,。其操作步驟同免疫沉淀法，得到洗脫的復(fù)合物后,，然后進(jìn)行SDS–PAGE分析,，用考馬斯亮藍(lán)或者銀染的方法染色后，切下未知蛋白的條帶,，用質(zhì)譜技術(shù)鑒定未知蛋白,。