日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

熒光標(biāo)記鬼筆環(huán)肽488(綠色)

產(chǎn)品貨號：G0059  

Abs/Em (nm)：490/515

存儲溫度：-20℃干燥,、避光保存,，有效期見外包裝,。若配制成水溶液,，應(yīng)小量分裝保存。

注意事項

本產(chǎn)品為凍干粉形式,，微量不易觀察,，使用前請瞬時離心，加適當(dāng)溶劑溶解后使用,，溶解后的溶液近乎透明色,。

產(chǎn)品簡介

鬼筆環(huán)肽是從致命的傘形毒蕈蘑菇中分離出來的一種毒素。 它是特異性結(jié)合于 F-肌動蛋白的雙環(huán)肽,。因此用熒光染料標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽可以非常方便的研究 F-肌動蛋白的分布,。鬼筆環(huán)肽內(nèi)部,，在半胱氨酸和色氨酸之間含有不常見的硫醚橋形成內(nèi)環(huán)結(jié)構(gòu)。在pH 升高時,，該硫醚被裂解,，鬼筆環(huán)肽失去對肌動蛋白的親和力。

熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽可在納摩爾水平染色F-肌動蛋白,。在各種植物細(xì)胞或動物細(xì)胞中,，標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽對大、小細(xì)絲具有相似的親和力,，平均每個肌動蛋白亞基結(jié)合一個鬼筆環(huán)肽分子,。不同于抗體，鬼筆環(huán)肽與肌動蛋白的結(jié)合親和力在不同物種間沒有顯著變化,。非特異性染色可以忽略不計,，染色和未染色區(qū)域之間的對比度非常大。鬼筆環(huán)肽將單體/聚合物的平衡轉(zhuǎn)向聚合狀態(tài),，將聚合臨界濃度降低至30倍,。Phallotoxins可通過抑制細(xì)胞松弛素的解聚， 碘化鉀和升高的溫度,，穩(wěn)定 F-肌動蛋白,，。因為鬼筆環(huán)肽綴合物很小,，大約直徑12-15埃,，分子量<2000道爾頓，多種肌動蛋白結(jié)合蛋白,，包括肌球蛋白,，原肌球蛋白和后肌鈣蛋白依然可以和鬼筆環(huán)肽標(biāo)記的肌動蛋白結(jié)合。更重要的是,， 鬼筆環(huán)肽標(biāo)記的肌動蛋白絲保持功能,，標(biāo)記甘油肌纖維仍然收縮，標(biāo)記的肌動蛋白絲仍然可以繼續(xù)移動,。而且熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽也可用于對細(xì)胞中 F-肌動蛋白進(jìn)行定量研究,。

實驗方法

儲液制備

熒光染料標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽：取適量甲醇或無菌水溶解棕色管中凍干的粉末，制備成200 T/mL的儲液（300T規(guī)格染料加入1.5 mL的液體,，50T規(guī)格染料加入0.25 mL的液體即可）,。

熒光標(biāo)記鬼筆環(huán)肽的一個單位（T）的定義是染色一個加載細(xì)胞的載玻片所用染料的量。 對于熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽,，使用時的推薦稀釋比例為1:40-1:200,，一個單位相當(dāng)于200 μL總?cè)旧w積中加入1-5 μL 200T/mL儲備溶液。

注：稀釋比例可以根據(jù)實際染色效果進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。

固定細(xì)胞染色

以下方案是針對生長在玻璃蓋玻片或8孔室玻片上的貼壁細(xì)胞的染色步驟,。鬼筆環(huán)肽也可用于染色固定的冷凍或石蠟組織切片,。

1. 用PBS清洗細(xì)胞3次。

2. 用含有3.75％甲醛的PBS溶液固定細(xì)胞,，冰上固定15 min,。

注意：甲醇可以在固定過程中破壞肌動蛋白。因此最hao避免含有任何甲醇的固定劑,。優(yōu)選的固定劑是不含甲醇的甲醛,。

3. 用PBS清洗細(xì)胞3次。

4. 用含0.5％Triton X-100的PBS溶液在室溫下透化細(xì)胞10 min,。

5. 用PBS清洗細(xì)胞3次,。

6. 用200μL PBS稀釋1-5 μL熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽儲液，加入一個蓋玻片或孔中,，室溫孵育20min,，進(jìn)行染色。

注：染色體積可根據(jù)樣本情況進(jìn)行調(diào)節(jié),。孵育過程中為避免染液揮發(fā),，可將蓋玻片放于密封容器內(nèi)。

7. 用PBS清洗細(xì)胞2-3次,。

8. 熒光顯微鏡觀察,。標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽具有很好的光穩(wěn)定，樣品可以在PBS中成像,，但為了效guo最jia,，也可以使用抗熒光淬滅劑觀察。

活細(xì)胞染色

熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽不具有細(xì)胞透性,，因此沒有被廣泛用于活細(xì)胞標(biāo)記,。然而，有報道稱活細(xì)胞可能通過胞飲或未知機(jī)制進(jìn)行標(biāo)記,。一般來說,，染色活細(xì)胞時需要更多的染料?；蛘?，熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽也可被注入到細(xì)胞中用于監(jiān)測肌動蛋白分布和細(xì)胞運(yùn)動。