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DiD 高氯酸鹽

產品貨號：D22031

儲存溫度：?20°C干燥避光

產品描述

DiD,，DiO,，DiI，DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料,，可以用來染細胞膜和其它脂溶性生物結構,。當與細胞膜結合后其熒光強度大大增強，這類染料有著很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命,。一旦對細胞染色,，這類染料在整個細胞膜上擴散，最jia濃度時可以使整個細胞膜染色,。它們的熒光顏色區(qū)分明顯：DiI（橙色熒光）,，DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和 DiR （深紅色熒光）這使得他們可以用來對活細胞進行多色成像和流式分析,。DiI和DiO可以分別用標準的 FITC和TRITC的濾光片,。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激發(fā)，有著比DiI更長的激發(fā)波長和發(fā)射波長,，在細胞和組織染色中更有價值,。 DiR的紅外熒光可以穿透細胞和組織，在活體成像中用來示蹤,。

表1.  DiD,，DiO，DiI,，DiR,，DiS的化學性質

使用方法

1. DiD，DiO,，DiI,，DiR和DiS細胞膜染色液制備

（1）配置DMSO或EtOH 儲存液：儲存液用 DMSO或EtOH配置濃度1～5 mM。

注意：未使用的儲存液保存在-20°C,，避免反復凍融,。

（2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲存液,，配制濃度為1～5 µM的工作液,。

注意：工作液的最終濃度是根據(jù)不同細胞和實驗的經驗來配制?？梢詮耐扑]濃度的十倍以上尋找最jia條件,。

2. 懸浮細胞染色

（1）懸浮細胞密度為 1 × 106/mL加入到工作液中

（2）在37 ℃培養(yǎng)細胞 2～20分鐘，不同的細胞最jia培養(yǎng)時間不同。

（3）染色細胞試管在1000～1500轉離心5分鐘,。

（4）傾倒上清液,，再次緩慢加入預溫37℃的培養(yǎng)液。

（5）重復（3）,，（4）步驟兩次以上,。

3. 粘壁細胞的染色

（1）使粘壁的細胞在無菌實驗室培養(yǎng)。

（2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片,，吸走過量培養(yǎng)液,，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中,。

（3）在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液,，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。

（4）在37 ℃培養(yǎng)細胞2～20分鐘,，不同的細胞最jia培養(yǎng)時間不同,。

（5）吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次,，每次用預溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細胞,，培養(yǎng)5～10min，然后吸干培養(yǎng)基,。

4. 顯微鏡檢測

（1）DiD,，DiO，DiI,，DiR和DiS濾光器的選擇參見表1,。

（2）多色染料的同時檢測，濾光器按照以下設定：

a) DiI和DiO＝Omega XF52,，Chroma 51004,；

b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007,；

c) DiI,，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005

5. 流式細胞儀的檢測

DiD,，DiO,，DiI，DiR和DiS 染色的細胞可以分別用經典的FL1,，F(xiàn)L2,，F(xiàn)L3和FL4流式細胞儀檢測。