日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

羅丹明標(biāo)記鬼筆環(huán)肽(橙紅）

產(chǎn)品貨號：G0063

儲存條件：-20℃干燥,、避光保存。配成溶液后建議分裝,。

產(chǎn)品參數(shù)

Ex/Em：546/575 nm

產(chǎn)品簡介：

鬼筆環(huán)肽是從致命的傘形毒蕈蘑菇中分離出來的一種毒素,。它是特異性結(jié)合于 F-肌動蛋白的雙環(huán)肽。因此用熒光染料標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽可以非常方便的研究 F-肌動蛋白的分布,。鬼筆環(huán)肽內(nèi)部,，在半胱氨酸和色氨酸之間含有不常見的硫醚橋形成內(nèi)環(huán)結(jié)構(gòu),。在pH 升高時，該硫醚被裂解,，鬼筆環(huán)肽失去對肌動蛋白的親和力,。

在各種植物細(xì)胞或動物細(xì)胞中，標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽對大,、小細(xì)絲具有相似的親和力,，平均每個肌動蛋白亞基結(jié)合一個鬼筆環(huán)肽分子。不同于抗體,，鬼筆環(huán)肽與肌動蛋白的結(jié)合親和力在不同物種間沒有顯著變化,。非特異性染色可以忽略不計，染色和未染色區(qū)域之間的對比度非常大,。鬼筆環(huán)肽將單體/聚合物的平衡轉(zhuǎn)向聚合狀態(tài),，將聚合臨界濃度降低至 30 倍。Phallotoxins 可通過抑制細(xì)胞松弛素的解聚,，碘化鉀和升高的溫度,，穩(wěn)定 F-肌動蛋白。因為鬼筆環(huán)肽綴合物很小,， 大約直徑 12-15 埃,，分子量<2000 道爾頓，多種肌動蛋白結(jié)合蛋白,，包括肌球蛋白,，原肌球蛋白和后肌鈣蛋白依然可以和鬼筆環(huán)肽標(biāo)記的肌動蛋白結(jié)合。更重要的是,，鬼筆環(huán)肽標(biāo)記的肌動蛋白絲保持功能,，標(biāo)記甘油肌纖維仍然收縮，標(biāo)記的肌動蛋白絲仍然可以繼續(xù)移動,。而且熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽也可用于對細(xì)胞中 F-肌動蛋白進行定量研究,。

使用方法

1、儲液制備

Rhodamine-Phalloidin：取適量甲醇或無菌水溶解棕色管中凍干的粉末,，制備成 200T/mL 的儲液（300T 規(guī)格染料加入 1.5 mL 的液體,，50T 規(guī)格染料加入 0.25 mL 的液體即可）。

Rhodamine-Phalloidin 的一個單位（T）的定義是染色一個加載細(xì)胞的載玻片所用染料的量,。對于羅丹明標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽,，使用時的推薦稀釋比例為 1: 40-1: 200，一個單位相當(dāng)于 200 μL 總?cè)旧w積中加入 1-5 μL 200T/mL 儲備溶液,。注：稀釋比例可以根據(jù)實際染色效果進行適當(dāng)調(diào)整,。

2、固定細(xì)胞染色

以下方案是針對生長在玻璃蓋玻片或 8 孔室玻片上的貼壁細(xì)胞的染色步驟,。鬼筆環(huán)肽也可用于染色固定的冷凍或石蠟組織切片,。

（1）用PBS 清洗細(xì)胞 3 次,。

（2）用含有 3.75%甲醛的 PBS 溶液固定細(xì)胞，冰上固定15 min,。

注：甲醇可以在固定過程中破壞肌動蛋白,。因此最hao避免含有任何甲醇的固定劑。優(yōu)選的固定劑是不含甲醇的甲醛,。

（3）用PBS 清洗細(xì)胞 3 次,。

（4）用含 0.5% Triton X-100 的PBS 溶液在室溫下透化細(xì)胞10min。

（5）用PBS 清洗細(xì)胞 3 次,。

（6）用 200 μL PBS 稀釋 1-5 μL 熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽儲液,， 加入一個蓋玻片或孔中，室溫孵育 20 min,，進行染色,。

注：染色體積可根據(jù)樣本情況進行調(diào)節(jié)。孵育過程中為避免染液揮發(fā),，可將蓋玻片放于密封容器內(nèi),。

（7）用 PBS 清洗細(xì)胞 2-3 次。

（8）熒光顯微鏡觀察,。標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽具有很好的光穩(wěn)定,，樣品可以在 PBS 中成像，但為了效guo最jia,，也可以使用抗熒光淬滅劑觀察。

3,、活細(xì)胞染色

熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽不具有細(xì)胞透性,，因此沒有被廣泛用于活細(xì)胞標(biāo)記。然而,，有報道稱活細(xì)胞可能通過胞飲或未知機制進行標(biāo)記,。一般來說，染色活細(xì)胞時需要更多的染料,?；蛘撸瑹晒鈽?biāo)記的鬼筆環(huán)肽也可被注入到細(xì)胞中用于監(jiān)測肌動蛋白分布和細(xì)胞運動,。

注意事項

本產(chǎn)品為凍干粉形式,，微量不易觀察，使用前請瞬時離心,，加適當(dāng)溶劑溶解后使用,，溶解后的溶液近乎透明色。