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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號 | G0063 |
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羅丹明標記鬼筆環(huán)肽(橙紅）
產(chǎn)品貨號：G0063
儲存條件：-20℃干燥、避光保存,。配成溶液后建議分裝,。
產(chǎn)品參數(shù)
Ex/Em：546/575 nm
產(chǎn)品簡介：
鬼筆環(huán)肽是從致命的傘形毒蕈蘑菇中分離出來的一種毒素,。它是特異性結(jié)合于 F-肌動蛋白的雙環(huán)肽。因此用熒光染料標記的鬼筆環(huán)肽可以非常方便的研究 F-肌動蛋白的分布,。鬼筆環(huán)肽內(nèi)部,，在半胱氨酸和色氨酸之間含有不常見的硫醚橋形成內(nèi)環(huán)結(jié)構(gòu)。在pH 升高時,，該硫醚被裂解,，鬼筆環(huán)肽失去對肌動蛋白的親和力。
在各種植物細胞或動物細胞中,，標記的鬼筆環(huán)肽對大,、小細絲具有相似的親和力，平均每個肌動蛋白亞基結(jié)合一個鬼筆環(huán)肽分子,。不同于抗體,，鬼筆環(huán)肽與肌動蛋白的結(jié)合親和力在不同物種間沒有顯著變化。非特異性染色可以忽略不計,，染色和未染色區(qū)域之間的對比度非常大,。鬼筆環(huán)肽將單體/聚合物的平衡轉(zhuǎn)向聚合狀態(tài)，將聚合臨界濃度降低至 30 倍,。Phallotoxins 可通過抑制細胞松弛素的解聚,，碘化鉀和升高的溫度，穩(wěn)定 F-肌動蛋白,。因為鬼筆環(huán)肽綴合物很小,， 大約直徑 12-15 埃，分子量<2000 道爾頓,，多種肌動蛋白結(jié)合蛋白,，包括肌球蛋白，原肌球蛋白和后肌鈣蛋白依然可以和鬼筆環(huán)肽標記的肌動蛋白結(jié)合,。更重要的是,，鬼筆環(huán)肽標記的肌動蛋白絲保持功能，標記甘油肌纖維仍然收縮,，標記的肌動蛋白絲仍然可以繼續(xù)移動,。而且熒光標記的鬼筆環(huán)肽也可用于對細胞中 F-肌動蛋白進行定量研究。
使用方法
1,、儲液制備
Rhodamine-Phalloidin：取適量甲醇或無菌水溶解棕色管中凍干的粉末,，制備成 200T/mL 的儲液（300T 規(guī)格染料加入 1.5 mL 的液體，50T 規(guī)格染料加入 0.25 mL 的液體即可）,。
Rhodamine-Phalloidin 的一個單位（T）的定義是染色一個加載細胞的載玻片所用染料的量,。對于羅丹明標記的鬼筆環(huán)肽，使用時的推薦稀釋比例為 1: 40-1: 200,，一個單位相當于 200 μL 總?cè)旧w積中加入 1-5 μL 200T/mL 儲備溶液,。注：稀釋比例可以根據(jù)實際染色效果進行適當調(diào)整,。
2、固定細胞染色
以下方案是針對生長在玻璃蓋玻片或 8 孔室玻片上的貼壁細胞的染色步驟,。鬼筆環(huán)肽也可用于染色固定的冷凍或石蠟組織切片,。
（1）用PBS 清洗細胞 3 次。
（2）用含有 3.75%甲醛的 PBS 溶液固定細胞,，冰上固定15 min,。
注：甲醇可以在固定過程中破壞肌動蛋白。因此最hao避免含有任何甲醇的固定劑,。優(yōu)選的固定劑是不含甲醇的甲醛,。
（3）用PBS 清洗細胞 3 次。
（4）用含 0.5% Triton X-100 的PBS 溶液在室溫下透化細胞10min。
（5）用PBS 清洗細胞 3 次。
（6）用 200 μL PBS 稀釋 1-5 μL 熒光標記的鬼筆環(huán)肽儲液,， 加入一個蓋玻片或孔中,，室溫孵育 20 min，進行染色。
注：染色體積可根據(jù)樣本情況進行調(diào)節(jié)。孵育過程中為避免染液揮發(fā)，可將蓋玻片放于密封容器內(nèi),。
（7）用 PBS 清洗細胞 2-3 次。
（8）熒光顯微鏡觀察,。標記的鬼筆環(huán)肽具有很好的光穩(wěn)定,，樣品可以在 PBS 中成像，但為了效guo最jia,，也可以使用抗熒光淬滅劑觀察,。
3、活細胞染色
熒光標記的鬼筆環(huán)肽不具有細胞透性,，因此沒有被廣泛用于活細胞標記,。然而，有報道稱活細胞可能通過胞飲或未知機制進行標記,。一般來說,，染色活細胞時需要更多的染料?；蛘?，熒光標記的鬼筆環(huán)肽也可被注入到細胞中用于監(jiān)測肌動蛋白分布和細胞運動。
注意事項
本產(chǎn)品為凍干粉形式,，微量不易觀察,，使用前請瞬時離心，加適當溶劑溶解后使用,，溶解后的溶液近乎透明色,。
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