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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號 | 0793 |
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噻唑蘭 MTT
產(chǎn)品貨號：0793-1
儲存條件：冰袋運輸。4℃避光干燥保存。
產(chǎn)品描述
噻唑蘭（Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide, MTT）,，也稱作溴化噻唑藍四氮唑，是一種黃色染料,，已經(jīng)普遍替代傳統(tǒng)的臺盼藍染色法或者放射性同位素插入法,，用來檢測細胞的活力，細胞增殖以及細胞毒性分析,。檢測原理在于：MTT是一種可接受氫離子的化合物染料,，帶正電荷，具有細胞膜滲透性,?；罴毎€粒體中的琥珀酸脫氫酶能夠?qū)⑼庠催M入的MTT還原成為水不溶性的深藍色MTT-甲臜結晶，而死細胞不具有此功能,。甲臜結晶是不能穿透細胞膜,，因此沉積在處于增殖且未受損傷的細胞內(nèi)。甲臜結晶可用DMSO或者酸化的異丙醇溶解出來,，酶標儀下測定570nm的吸光度反映甲臜的生成量,。而甲臜的生成量與活細胞數(shù)目成正比，用以評估細胞存活狀況,。
MTT也可用作免疫組化/細胞化學染色試劑,，也可用來檢測NAD。MTT被快速還原成甲臜后,，能夠螯合鎳,，銅和鈷,。鈷螯合物可參與機體氧化系統(tǒng)。
產(chǎn)品性質(zhì)
中文別名（Chinese Synonym） | 溴化噻唑藍四氮唑,；3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2, 5-二苯基溴化四氮唑噻唑藍,； |
英文別名（English synonym） | 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-Tetrazolium； Bromide;Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide; Thiazoyl blue tetrazolium bromide; |
CAS號（CAS NO.） | 298-93-1 |
分子式（Formula） | C18H16N5SBr |
分子量（Molecular weight） | 414.3 |
純度（Purity） | ≥98% |
熔點（melting point） | 187℃ |
溶解性（Solubility） | 溶于水,，甲醇 |
外觀（Appearance） | 淡黃色至橙色粉末 |
使用方法（以96孔板為例）
細胞生長的培養(yǎng)條件會影響檢測結果,，因此進行MTT檢測時需考慮這些條件，包括：培養(yǎng)時間,，傳代次數(shù)以及生長培養(yǎng)基的成分等,。一般情況，48-72h培養(yǎng)時間下,，最初鋪板的細胞密度可控制在5000-10,000/孔,。
【注】
最終檢測的培養(yǎng)液內(nèi)含有酚紅會嚴重影響檢測結果。推薦MTT檢測時細胞培養(yǎng)在無酚紅環(huán)境下,。也可以在進行MTT孵育的時候改用無酚紅培養(yǎng)液,。
A．工作液配制
1）MTT溶液
生化研究中，常配制成5mg/mL的儲備液,。MTT最hao現(xiàn)配現(xiàn)用,，可以稱取MTT 0.5 g，溶于100 mL的磷酸緩沖液（PBS）或無酚紅的培養(yǎng)基中,，用0.22 μm濾膜過濾以除去溶液里的細菌,，4℃ 避光短時間保存。建議小劑量分裝放到-20℃長期保存,，避免反復凍融,。
2）SDS-HCl溶液（MTT終止液）
取10 mL 0.01 M HCl加入1 g SDS，顛倒混勻或者超聲使其*溶解,，此時即為終止液,。建議現(xiàn)配現(xiàn)用。
B．MTT細胞增殖檢測
1）接種細胞：用含10%胎牛血清（FBS）的培養(yǎng)液配制成單個細胞懸液,，調(diào)整細胞密度,，以每孔5000-10, 000個細胞接種到96孔板，每孔體積100 µL,，培養(yǎng)板的邊緣孔用無菌PBS填充,。設置空白對照孔（不含有細胞）。
2）37℃,，5% CO2,，培養(yǎng)24-72 h。
3）可選：對于貼壁細胞,，去除舊的培養(yǎng)液,，更換100 µL/孔新鮮的培養(yǎng)液（不含酚紅）,；對于懸浮細胞，離心96孔板,，去除盡可能多的上清液,。然后加入 100 µL/孔新鮮的培養(yǎng)液（不含酚紅）重懸細胞；
4）每孔加入10 µL MTT溶液（5 mg/mL）,，加樣時盡量勤換槍頭,，控制加量誤差。
5）水平搖床上低速混勻1 min后,，放入37℃培養(yǎng)箱孵育4h,。【注】：對于高密度的細胞（>100,000 cells/孔）可縮短孵育時間至2 h,。
6）對于貼壁細胞,，直接吸掉舊的培養(yǎng)液，避免槍尖刮破單細胞層,。對于懸浮細胞,，離心收集細胞，去除培養(yǎng)液,。
7）加入100 µL/孔SDS-HCl溶液，用槍充分混勻后放入37℃培養(yǎng)箱孵育4 h,?！咀ⅰ浚焊L的孵育時間會降低檢測靈敏度。
8）孵育結束,，放置在酶標儀上搖勻后,，選擇570 nm，測定吸光度,。記錄結果,，比色以空白調(diào)零。
【注】
對于細胞毒性檢測,，以未經(jīng)藥物處理細胞的OD值為百分之bai,，然后計算藥物處理細胞所占的比率（x），公式如下：OD（未處理細胞）/OD（藥物處理細胞）=百分之bai/x,。然后建立直方圖,。
注意事項
1）溶解甲臜的有機溶劑具有毒性，使用時注意防護,。
2）MTT有致癌性,，應小心操作；MTT溶液需要無菌,，因其對菌很敏感,。MTT溶液不可4℃保存超過1周,，因其可能發(fā)生降解，導致檢測結果錯誤,。
3）MTT法只能用來檢測細胞相對數(shù)和相對活力,，但不能測定細胞絕dui數(shù)。在用酶標儀檢測結果的時候,，為了保證實驗結果的線性,，MTT吸光度最hao在0-0.7范圍內(nèi)。
4）為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作,。
5）本產(chǎn)品僅作科研用途！
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