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線性PEI轉染試劑

產品貨號：P4000

存儲條件：室溫運輸，粉末在室溫或4 oC保存,，有效期2年。儲存液 在4 oC保存,，有效期至少6個月,。

產品簡介：

Polyethylenimine Linear（PEI）溶液是由一種陽離子聚合物轉染試劑，分子量40000,，它能與核酸形成復合物,，并使該復合物進入哺乳動物細胞。線性PEI轉染試劑適用廣泛,。該試劑可在含血清與抗生素的*培養(yǎng)基中發(fā)揮作用,，即使在有血清存在的情況下，它仍然能高效的將核酸導入細胞,。實驗操作簡單,，對大多數培養(yǎng)細胞都有較高的轉染效率(用于常見細胞系，如HEK-293,、HEK293T,、Hep G2、Hela,、CHO-K1,、COS-1、COS-7,、NIH/3T3和Sf9等),，并且細胞毒性較低,。

儲存液配置（1 mg/mL）

1.材料

PEI 40000、Milli-Q® 水/注射用水（WFI）或類似的生物級水,、1 mol/L氫氧化鈉（NaOH）,、一次性0.1~0.2 μm PES真空無菌過濾器、無菌HDPE或聚丙烯儲存瓶,。

2. 配置儲存液（1 mg/mL）

1）于1 L玻璃燒杯,，將1g PEI 40000粉末加入900 mL Milli-Q®超純水或其他相當級別的生物用水中，在磁子攪拌器上攪拌均勻,，產生小渦,；

2）待PEI 40000*溶解（通常不到5min）；

3）邊攪拌邊滴加1 mol/L氫氧化鈉溶液,，調節(jié)pH為6.90~7.10,；

注：如果pH值>7.10，請使用鹽酸將pH值調至6.90~7.10,；

4）將溶液轉入量筒內,，并加水定容到1 L；

5）用一次性0.1~0.2 µm PES真空過濾器過濾除菌,，即得到1 mg/mL的儲存液,；

6）根據需要分裝并儲存在4 °C，至少6個月穩(wěn)定,。

操作流程（以6孔板為例）

1.細胞鋪板

提前一天將細胞種植在六孔板中,，以轉染時細胞密度在70%~80%為宜。

2.轉染過程

1）在轉染前2h,，移除細胞上原有的培養(yǎng)基,，換為新鮮的*培養(yǎng)基。

2）將2ug質粒DNA用50uL無血清稀釋液稀釋,，充分混勻制成DNA稀釋液,。

注意：無血清稀釋液建議采用Opti-MEM或ddH2O。

3）向DNA稀釋液中直接加入4uL轉染試劑,，室溫靜置10~15min,。轉染復合物配制完成。

4）將轉染復合物加入細胞培養(yǎng)基中,，輕柔混勻,。

5）繼續(xù)培養(yǎng)24~48h，收取細胞進行鑒定或加入相應抗生素篩選穩(wěn)定克隆,。

6）使用本產品轉染后一般在24h開始進入表達高峰期,，36~48h達到表達高峰，相對于脂質體轉染試劉，達到峰值的時間延后約6~12h,。

不同細胞培養(yǎng)容器轉染用量：

注意事項：

1,、對大多數細胞來而言，每1μg DNA 使用3.0μL PEI MAX轉染試劑都能獲得較高轉染效率,。也可嘗試每1μg DNA使用 1.5~4 μL體積線性PEI 40000轉染試劑進行優(yōu)化,。

2、為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套及通風櫥操作,。

3、本產品僅用于科研用途,，不可用于人體,。