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LabFect SP懸浮細(xì)胞小核酸轉(zhuǎn)染試劑

貨號(hào)：T1024

存儲(chǔ)條件：藍(lán)冰運(yùn)輸,，4°C 保存，超一個(gè)月不用于-20°C儲(chǔ)存,，-20℃保存條件下,，有效期為 1 年。避免反復(fù)凍融,。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

卓yue的懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染性能：細(xì)胞轉(zhuǎn)染陽(yáng)性率一般在75%以上,，基因敲除效率在80%以上；

極低的細(xì)胞毒性：轉(zhuǎn)染細(xì)胞死亡率不到10%,，大大降低了因細(xì)胞毒性對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響,；

轉(zhuǎn)染細(xì)胞范圍廣，絕大多數(shù)懸浮細(xì)胞都能獲得比較理想的轉(zhuǎn)染結(jié)果,。

產(chǎn)品介紹

LabFect 可用來(lái)轉(zhuǎn)染 siRNA,、miRNA mimics、miRNA inhibitor 等 200bp 以內(nèi)的小分子 RNA，可轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)懸浮細(xì)胞,。目前,， 無(wú)論國(guó)外還是國(guó)內(nèi)，懸浮細(xì)胞的核酸轉(zhuǎn)染都是個(gè)熱點(diǎn)難題,，市場(chǎng)還缺乏真正有效的商品化的懸浮細(xì)胞小核酸轉(zhuǎn)染試劑,。LabFect 能夠高效轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)懸浮細(xì)胞，獲得比較理想的基因敲除效果,。對(duì)于大多數(shù)懸浮細(xì)胞,，LabFect 的細(xì)胞轉(zhuǎn)染陽(yáng)性率都在 75%以上，而轉(zhuǎn)染細(xì)胞死亡率不到10%,。LabFect 的使用也極其簡(jiǎn)便,，先將 sRNA 與 LabFect 室溫混合，再將siRNA-LabFect 混合物直接加入含培養(yǎng)基的細(xì)胞,，血清對(duì)轉(zhuǎn)染效果沒(méi)有影響,，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液。

應(yīng)用：

siRNA 轉(zhuǎn)染

antisense RNA 轉(zhuǎn)染

200bp 內(nèi)的小分子 DNA 轉(zhuǎn)染

質(zhì)量控制

本產(chǎn)品經(jīng)嚴(yán)格的質(zhì)量檢驗(yàn)證明,，無(wú)生物污染,。

操作步驟：本說(shuō)明書(shū)適用于24孔培養(yǎng)板的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，其他規(guī)格的培養(yǎng)板的用量參照下面表格,，表格給出的是每孔的用量與體積,。 

1. 細(xì)胞接種：轉(zhuǎn)染前一天接種細(xì)胞，每孔500 μl培養(yǎng)基,，使細(xì)胞在轉(zhuǎn)染時(shí)密度在30-50%,，盡量不要使用抗生素。

2.  siRNA-Labfect SP混合物準(zhǔn)備：

2.1  6pmol siRNA 用 50μl 無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋,。

2.2  2μl Labfect SP用 50μl 無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋,。輕輕混勻，室溫孵育 5min,。

注意：確保在 25 min 內(nèi)執(zhí)行第三步操作,，不要過(guò)于延遲。   

2.3 孵育 5min 后,，將 siRNA 稀釋液與 Labfect SP稀釋液混合（總體積 100μl）,。輕輕混勻，室溫孵育 20 min,。

3.  將混合物加到培養(yǎng)的細(xì)胞內(nèi)（*培養(yǎng)基培養(yǎng)）：

3.1  將100μl混合物加入培養(yǎng)孔內(nèi),，培養(yǎng)孔內(nèi)含有 0.5ml 培養(yǎng)的細(xì)胞。輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)板 5min,，混勻,。

3.2  37°C培養(yǎng)48-72h,，檢測(cè)基因抑制效果。如果需要,，細(xì)胞培養(yǎng)4-6h時(shí)可以更換培養(yǎng)基，但不是必須,。孵育時(shí)間的長(zhǎng)短,，取決于細(xì)胞類(lèi)型、 所干擾基因本身及分析方法,?？稍O(shè)置不同的孵育時(shí)間進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以確定最jia孵育時(shí)間。

注意事項(xiàng):

1. 懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染難度較大,，首ci轉(zhuǎn)染時(shí),，請(qǐng)務(wù)必對(duì)轉(zhuǎn)染條件進(jìn)行優(yōu)化。例如：24 孔培養(yǎng)板,，可進(jìn)行如下交叉實(shí)驗(yàn)：

2. 轉(zhuǎn)染時(shí),，細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)應(yīng)保持良好，密度不能過(guò)大,，培養(yǎng)液盡量不要使用抗生素,，否則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡增加。

3. 為了提高轉(zhuǎn)染效率,，轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)板可放于微型振蕩器上培養(yǎng)或每隔 1 小時(shí)人工晃動(dòng) 1 次,。

LabFect Transfection Reagent Formats for Various Cell Culture Vessels