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LabFect 小核酸轉染試劑

貨號：T1011

存儲條件：藍冰運輸，4°C保存,，超一個月不用于-20°C儲存,，避免反復凍融。-20℃保存條件下,，有效期為1年,。

產品說明：

LabFect可用來轉染 siRNA、antisense RNA,、microRNA等200bp以內的小分子RNA和DNA,，轉染細胞包括絕大多數貼壁生長的細胞，如一般細胞株,、腫瘤細胞株等,。目前，無論國外還是國內,，轉染試劑的主要成分均為脂質體或聚乙烯亞胺(Polyethylenimine, PEI)，這兩種成分都具有很大的細胞毒性,，并且轉染效果不好,。LabFect采用新型的動物源性的納米材料，毒性很低并且擁有非常卓yue的轉染性能,。與其它品牌的小核酸轉染試劑相比,，LabFect的細胞轉染陽性率一般在90%以上，Lamin A/C基因抑制效率在95%以上,，而其它品牌轉染試劑的細胞轉染陽性率一般不超過 70%,，Lamin A/C基因抑制效率不超過75%。LabFect細胞毒性很低，轉染細胞死亡率不到10%,，而其它品牌試劑的轉染細胞死亡率一般在30%以上,。血清對轉染效果沒有影響，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液,。

產品特點：

卓yue的細胞轉染性能：細胞轉染陽性率高達 90%以上,，基因敲除效果明顯，A549 細胞 Lamin A/C基因敲除效率在95%以上,；

極低的細胞毒性：轉染細胞死亡率不到 10%,，大大降低了因細胞毒性 對實驗結果的影響；

轉染細胞范圍廣,，絕大多數貼壁細胞株都能獲得比較理想的轉染結果,。

應用：

siRNA 轉染

antisense RNA 轉染

200bp 內的小分子 DNA 轉染

操作步驟：本說明書適用于24孔培養(yǎng)板的轉染實驗，其他規(guī)格的培養(yǎng)板的用量參照下面表格,，表格給出的是每孔的用量與體積,。

1. 細胞接種：

轉染前一天接種細胞，每孔500μl培養(yǎng)基,，使細胞在轉染時密度在30-50%,，盡量不要使用抗生素。

2. siRNA-LabFect混合物準備：

a. 6pmol siRNA用50μl無血清培養(yǎng)基稀釋,。

b. 2μl LabFect 用50μl無血清培養(yǎng)基稀釋,。輕輕混勻，室溫孵育5min,。注意：確保在25 min內執(zhí)行第三步操作,，不要過于延遲。

c. 孵育5min后,，將siRNA稀釋液與LabFect稀釋液混合（總體積100μl）,。輕輕混勻，室溫孵育20 min,。

3. 將混合物加到培養(yǎng)的細胞內（*培養(yǎng)基培養(yǎng)）：

a. 將100μl混合物加入培養(yǎng)孔內,，培養(yǎng)孔內含有0.5ml培養(yǎng)的細胞。輕輕晃動培養(yǎng)板,，混勻,。

b. 37°C 培養(yǎng) 18-72h，檢測基因抑制效果,。如果需要,，細胞培養(yǎng)4-6h時可以更換培養(yǎng)基，但不是必須,。孵育時間的長短,，取決于細胞類型,、所干擾基因本身及分析方法?？稍O置不同的孵育時間進行實驗以確定最jia孵育時間,。

轉染實驗優(yōu)化：

為了提高轉染效率，最hao對轉染條件進行優(yōu)化,，特別是首ci使用,。例如：24孔培養(yǎng)板，調整siRNA與LabFect試劑的用量,。siRNA用量在0.6-30 pmol (final concentration 1-50 nM)之間調整,，LabFect試劑用量在1.0-3.0μl之間調整。

轉染實驗要點：

轉染過程盡量不要使用抗生素,，否則會導致細胞死亡增加,； 首ci實驗 siRNA 的用量設置在終濃度 10nM、30nM,、50nM,、100 nM 進行摸索 ，后續(xù)實驗根據實驗結果修改,。

質量控制

本產品經嚴格的質量檢驗證明,，無生物污染

注意：

本產品僅用于科研實驗

LabFect Transfection Reagent Formats for Various Cell Culture Vessels