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參考價(jià)	1300

分子生物學(xué)試劑

DNA相關(guān)

內(nèi)切酶

克隆相關(guān)

核酸電泳

qPCR相關(guān)

反轉(zhuǎn)錄相關(guān)

PCR相關(guān)

核酸純化相關(guān)

LABLEAD

供貨周期	現(xiàn)貨	規(guī)格	100T
貨號(hào)	F0202O

詳細(xì)介紹

反轉(zhuǎn)錄試劑盒（Primer Flexible）

產(chǎn)品貨號(hào)：F0202O

存儲(chǔ)條件：-20°C

產(chǎn)品組分：

組分	規(guī)格
RTase III Primer Flexible All-in-One Mix	400 μl
Oligo(dT)20VN (50 μM)	100 μl
Random hexamers (50 μM)	100 μl
Nuclease-Free Water	2×1 ml

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

RTase III Primer Flexible All-in-One Mix是一款高效、便減少污染的高質(zhì)量一鏈cDNA合成預(yù)混液,，包含M-MLV GIII Reverse Transcriptase及其反應(yīng) Buffer,、RNA 酶抑制劑、dNTPs等一鏈 cDNA 合成所需的多種組分,，還需加入RNA 模板,、引物和水即可開(kāi)始反應(yīng)，操作非常方便,。針對(duì)不同實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)可靈活使用不同類型的逆轉(zhuǎn)錄引物,，滿足多樣化的實(shí)驗(yàn)需求，可根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景選擇Oligo(dT)20VN 或Random hexamers 或 Gene Specific Primers,。使用該逆轉(zhuǎn)錄預(yù)混液 15 分鐘內(nèi)最長(zhǎng)可獲得12 kb大小的cDNA,。

使用方法

1.于冰上配制如下反應(yīng)體系：

試劑	使用量
模板 RNAa	50 ng~1 μg
RTase III Primer Flexible All-in-One Mix	4 μl
Oligo(dT)20VN (50 μM)	1 μl
或 Random hexamers (50 μM)	1 μl
或 Gene Speci?c Primers (50 μM)	0.1 μl
Nuclease-Free Water	To 20 μl

a.推薦使用試劑盒提取的已去除基因組 DNA 污染的高質(zhì)量 RNA 作為模板。

2.輕柔吸打混勻,，瞬離,；

3.55℃溫育 15 min；

注：若目標(biāo) RNA 不含 Poly(A) 結(jié)構(gòu)，可預(yù)先 25℃溫育 10 min,。

4.反應(yīng)結(jié)束后,，85℃溫育 5 min 以終止反應(yīng)；

5.將獲得的cDNA 溶液置于冰上,，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),；或立即保存于 -20℃。

注：

1.后續(xù)實(shí)驗(yàn)為克隆實(shí)驗(yàn),，若RNA 來(lái)源于真核生物,，只需使用 Oligo (dT) VN 即可，加入 Random hexamers 會(huì)降低全長(zhǎng) cDNA 的產(chǎn)量,；若 RNA 來(lái)源于原核生物,，只需使用 Random hexamers 或 Gene Speci?c Primers。

2.后續(xù)實(shí)驗(yàn)為qPCR,，請(qǐng)同時(shí)加入Oligo(dT) VN和Random hexamers以獲得mRNA不同位置逆轉(zhuǎn)錄效率均一的cDNA,。

注意事項(xiàng)

為了防止 RNase 污染，請(qǐng)保持實(shí)驗(yàn)區(qū)域潔凈,；操作時(shí)需穿戴干凈的手套,、口罩；實(shí)驗(yàn)所用的離心管,、槍頭等耗材均需保證 RNasefree,。