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布魯克磁共振事業(yè)部

利用核磁共振(NMR)對死后代謝物變化進(jìn)行分析

時(shí)間:2023-3-15 閱讀:327
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利用核磁共振(NMR)對死后代謝物變化進(jìn)行分析,,可提供準(zhǔn)確可靠的死亡時(shí)間信息。

法醫(yī)學(xué)對法庭的重要性不言而喻——所提供的科學(xué)證據(jù)對定罪或者無罪審判而言,,至關(guān)重要,。可提供的證據(jù)包括指紋識(shí)別,、DNA分析,、血濺形態(tài)分析(BPA)、死亡時(shí)間以及死后間隔時(shí)間(PMI),。

PMI間隔在上述證據(jù)中最為常用,,因此它被認(rèn)為是最重要的數(shù)據(jù)。確定PMI的方法有如下幾種:根據(jù)尸體的物理變化(包括體溫,、肌肉僵硬程度及尸斑),;DNA降解,;法醫(yī)昆蟲學(xué);以及碳定年法,。在死后的幾個(gè)小時(shí)內(nèi),,可通過分析尸體的物理變化來得到準(zhǔn)確的PMI計(jì)算結(jié)果。針對死后幾周到幾年的情況,,則其他方法更為精確,。對于死后幾小時(shí)到幾周這段時(shí)間,目前還尚未存在任何一種方法,,可提供準(zhǔn)確可靠的PMI數(shù)據(jù),。

代謝組學(xué)在PMI推斷方面,具有無限潛力

目前,,代謝組學(xué)展示出了無限的潛力,,可在死后幾小時(shí)到幾周這段時(shí)間,對PMI進(jìn)行推斷,。該技術(shù)可分析生物體內(nèi)系統(tǒng)的全部成分,,可對死后體液中的代謝物變化進(jìn)行監(jiān)測。理想情況下,,這些代謝物變化應(yīng)隨著死后相對較長的時(shí)間,,線性出現(xiàn)。這樣的話便可獲得準(zhǔn)確可靠的數(shù)據(jù),。因此,,目前這項(xiàng)研究正著手于,在那些與上述條件高度契合的體液中尋找具潛力的代謝物,。

許多初步研究已經(jīng)在一系列的體液中,,確定了代謝變化,但最近在動(dòng)物模型上開展的工作,,表明了眼液——即房水(AH)和玻璃體液(VH),,是適用于PMI推斷的體液。與其他諸如血液之類的體液相比,,從解刨學(xué)角度上看,,眼液是單獨(dú)隔離開的。因此其代謝物變化較慢,,這使得測量更為可靠,。

最近,一些來自俄羅斯國際斷層掃描中心和新西伯利亞法醫(yī)臨床局的研究人員開展了一項(xiàng)研究,,用于確定眼液在人體PMI推斷中,,是否也同樣具有前景。并且他們還測定了具潛力的代謝物,作為該類分析的生物標(biāo)志物,。

通過使用布魯克Avance III 核磁共振波譜儀,,來識(shí)別代謝物生物標(biāo)志物

該團(tuán)隊(duì)從那些具有不同PMI間隔的人類尸體上收集了血液、AH和VH,,并對這些樣品進(jìn)行了處理,,然后得到了血漿、AH中的去蛋白提取物以及VH中的去脂質(zhì)提取物,。利用布魯克Biospin Avance III HD 700 MHz NMR波譜儀,,可通過核磁共振(NMR)技術(shù)對這些樣品進(jìn)行代謝組學(xué)定性分析。

根據(jù)所得數(shù)據(jù),,研究人員在三個(gè)樣品中發(fā)現(xiàn)了42種代謝物,。在這組樣品中,有6種代謝物與所有體液中的PMI都展示出了高度線性正相關(guān)性,。它們是次黃嘌呤,、膽堿、肌酸,、甜菜堿,、谷氨酸和甘氨酸,。

血液中的代謝物濃度變化較為雜亂無章,,而與血液相比,AH和VH中的濃度變化則更慢且更為平穩(wěn),。這些數(shù)據(jù)有力地支持了之前在動(dòng)物中進(jìn)行的代謝組學(xué)分析,,因此可得到如下結(jié)論:AH和VH更適用于PMI推斷。

在這兩種眼液中,,研究人員在VH中觀察到了很強(qiáng)的PMI與代謝物濃度的線性正相關(guān)關(guān)系,。這種現(xiàn)象的原因歸結(jié)于VH具有較高的黏度,并相較于AH,,其與血管系統(tǒng)的隔離程度較高,。然而,AH取樣過程具有更低的血液污染風(fēng)險(xiǎn)——這可避免實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生錯(cuò)誤,。并且由于AH含有非常低的蛋白質(zhì)和脂質(zhì),,因此其樣品制備更為簡單。

結(jié)合多種生物標(biāo)記物進(jìn)行分析,,可提高PMI推斷的準(zhǔn)確性

到目前為止,,該領(lǐng)域絕大部分的科研文章都專注于使用一種代謝物來作為PMI推斷的生物標(biāo)志物。然而,,這項(xiàng)研究確定了6種潛在的,、可用作PMI生物標(biāo)志物的代謝物。因此,研究人員還進(jìn)行了基于多種代謝物的代謝組學(xué)分析,。

AH中的肌酸,、膽堿和甜菜堿,以及VH中的肌酸和甜菜堿——這些代謝物呈現(xiàn)出了與PMI的強(qiáng)正相關(guān)性,。利用2-3種這樣的生物標(biāo)志物組合,,可顯著降低PMI推斷的誤差。有趣的是,,使用三個(gè)以上這樣的代謝物并不能進(jìn)一步提高PMI推斷的準(zhǔn)確性,。

總結(jié)

這項(xiàng)研究為動(dòng)物數(shù)據(jù)提供了支持,表明了與血漿相比,,那些解剖學(xué)上被隔離的液體更適用于PMI推斷,,因?yàn)槠浯x變化較慢且較平穩(wěn)。AH和VH都能提供準(zhǔn)確可靠的信息,。雖然VH數(shù)據(jù)更為準(zhǔn)確,,但AH樣品更容易制備,受污染風(fēng)險(xiǎn)更小,。

由于這幾種代謝物(次黃嘌呤,、膽堿、肌酸,、甜菜堿,、谷氨酸和甘氨酸)——它們與PMI都呈線性正相關(guān)關(guān)系,因此文章作者建議,,可在分析中結(jié)合使用這幾種生物標(biāo)志物,,以提高PMI推斷的準(zhǔn)確性、可靠性及盡可能地減少誤差,。

一套應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)的,、全面的解決方案組合

布魯克可為法醫(yī)學(xué)分析提供一套全面的解決方案組合,包括:對毒品與興奮劑,、化學(xué)戰(zhàn)劑(CWA)進(jìn)行識(shí)別和量化分析,、對爆炸物進(jìn)行表征、對食品摻假,、藝術(shù)品和文件偽造進(jìn)行檢測,,以及環(huán)境法醫(yī)學(xué)方向檢測,如廢料分析以及犯罪現(xiàn)場調(diào)查(如玻璃,,纖維及槍擊殘留物分析),。布魯克研發(fā)的技術(shù)不僅可應(yīng)用于每日常規(guī)分析,還可用于研發(fā)和完善新方法(以本文中的研究為例),。布魯克的目標(biāo)是讓執(zhí)法部門能夠?yàn)榉沙绦蛱峁┮恢虑矣辛Φ臄?shù)據(jù)——社會(huì)將因此更加安全,。

參考文獻(xiàn):

1.    Zelentsova, E., A., et al. (2020). Post-Mortem Changes in Metabolomic Profiles of Human Serum, Aqueous Humor and Vitreous Humor. Metabolomics. https://doi.org/10.1007/s11306-020-01700-3.

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