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上海翼和生物通過亞硫酸氫鹽（bisulfite）處理,，用多重PCR擴(kuò)增目的片段,，添加barcode和測序通用接頭,，在Illumina X10二代測序平臺對PCR產(chǎn)物進(jìn)行高通量測序，利用生物信息學(xué)方法,，精確定量計算目標(biāo)區(qū)間內(nèi)的甲基化位點的甲基化狀態(tài),，在完成目標(biāo)區(qū)域檢測的同時大幅降低研究費用。

Hi-MethylSeq結(jié)合了亞硫酸鹽轉(zhuǎn)換,、靶向擴(kuò)增子高通量測序技術(shù),，可實現(xiàn)多區(qū)段、多位點的甲基化精確定量分析,。本方法適用于感興趣的目的片段的甲基化研究,，在大樣本中進(jìn)一步確認(rèn)全基因組甲基化研究挑選的陽性位點。

重亞硫酸鹽處理是甲基化分析中基因組DNA處理的金標(biāo)準(zhǔn),，是一個化學(xué)過程,，可造成DNA的損傷，很難同時實現(xiàn)*轉(zhuǎn)換效率和保持DNA的完整性,，二者需要做出一定的平衡,。Hi-MethylSeq在CpG島之外選取3段內(nèi)參序列中的C作為內(nèi)對照，準(zhǔn)確評估樣本的轉(zhuǎn)化率,。

目標(biāo)區(qū)間甲基化重測序原理示意圖 

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