細(xì)菌計數(shù)
細(xì)菌細(xì)胞計數(shù)是建立或監(jiān)測細(xì)菌生長速度,、確定種群倍增時間所必需的,。細(xì)菌培
養(yǎng)物可以通過測定活細(xì)胞數(shù)來確定，活細(xì)胞數(shù)是每 mL 的菌落形成單位數(shù)
(CFU/mL),，或者通過使用分光光度計測量 600 nm 處的光密度（OD600）來間接
分析細(xì)胞總數(shù),。必須指出的是，細(xì)菌的生長速度和培養(yǎng)要求在不同菌種之間可能
有很大的差異,，因此很難用同一種方式量化所有的細(xì)菌,。下面，科博瑞 提供了一
個關(guān)于如何確定細(xì)菌細(xì)胞計數(shù)的一般程序,。
活體計數(shù)：
為了計數(shù)細(xì)菌懸浮液中的 CFU,，從活躍的細(xì)菌液體培養(yǎng)物中吸取一定的體積在
適當(dāng)?shù)囊后w介質(zhì)中稀釋。稀釋的程度將取決于菌株的生長速度和階段,。為了準(zhǔn)確
測定活細(xì)胞數(shù),，應(yīng)準(zhǔn)備一系列稀釋液和相應(yīng)的平板。要確定稀釋度,，請使用以下
公式：
例如,，如果 1.0mL 的原菌液與 9.0mL 的稀釋劑混合,，稀釋度是 1/(1+9)或 1/10。
這是 1 到 10 的稀釋度,，因為一個體積被稀釋到總共 10 個體積,。稀釋度也可以寫
成 1：10，或按指數(shù)寫成 10 -1,。
在制備稀釋系列之后,，每個稀釋液使用涂布平板技術(shù)無菌地涂布到幾個平板上，
然后在最佳條件下生長,。必須注意的是,，培養(yǎng)物的體積也應(yīng)該被考慮到最終計算
的稀釋度中。例如,，如果涂布量為 0.1mL,，則被視為 1：10 的稀釋度。這是因為
最終的細(xì)胞計數(shù)是以每 mL 的 CFU 數(shù)來計算的,，而 0.1mL 是十分之一毫升,。
注意：這個 0.1mL 是 科博瑞實驗室平板計數(shù)實驗常用的體積，用的是提前準(zhǔn)備
好的平板,，不需要給培養(yǎng)基水浴保溫,，可以節(jié)約操作時間。食品或環(huán)境監(jiān)測請按
照國標(biāo)里面的體積要求計數(shù)
經(jīng)過一段合適的生長期后,，每個平板上生長的菌落數(shù)量可以被計數(shù),。為了獲得zui
hao的結(jié)果，只能使用菌落數(shù)在 30-300 之間的平板,，因為這將提供細(xì)菌濃度的準(zhǔn)
確表示,。要確定 CFU/mL，請使用以下公式：
稀釋倍數(shù)
CFU/mL ? 平均菌落數(shù)
具體來說,，計算一個稀釋系列的菌落數(shù)量的平均值,，然后除以平板上的最終稀釋
度。例如,，如果在稀釋度為 10 -7時（試管 10 倍系列稀釋到 10 -6,，取 0.1mL 涂布
平板計數(shù)），從一組平板中獲得三種計數(shù)：40,、37 和 43,，細(xì)菌滴度將為
4.0x10 8CFU/mL。
實驗材料
1 細(xì)菌的液體培養(yǎng)物
2 移液槍
3 酒精燈
4 系列稀釋液
5 涂布棒
6 固體平板
7 酒精棉球
8 旋渦混勻器
操作步驟
1 如上圖所示給稀釋管和瓊脂平板貼上標(biāo)簽（標(biāo)簽很重要,，不然容易混淆）,。
2 通過小心地旋轉(zhuǎn)混合物來輕輕地混合培養(yǎng)物懸浮液
3 無菌取出 1.0mL 培養(yǎng)物并將其移入 9mL 的 10-1 稀釋液空白中。旋渦混勻器混
勻，混合 10-1的稀釋液,。
4 換用新的無菌槍頭,，從 10-1稀釋中取出 1.0mL，轉(zhuǎn)移到 9mL 的 10-2稀釋管中,。
旋渦混勻器混勻,。
5 在每根試管子之間使用新的槍頭，繼續(xù)連續(xù)稀釋到 10-6（也可以根據(jù)需要繼續(xù)
稀釋）,。
6 做完后稀釋系列,，回到 10-2稀釋管中。輕輕地旋轉(zhuǎn)樣品,。然后用新槍頭,，將 0.1mL
轉(zhuǎn)移到瓊脂培養(yǎng)皿中，進(jìn)行平板涂布,，做 2-3 個重復(fù),。將涂布后的平板放置在適
宜的培養(yǎng)環(huán)境中。
7 繼續(xù)吸取后續(xù)的稀釋系列涂布,。在適當(dāng)?shù)臏囟群蜕L周期下,，將每一盤瓊脂倒
置培養(yǎng)。
9 選擇有 30-300 個菌落的培養(yǎng)皿,，數(shù)一數(shù)培養(yǎng)皿上的菌落數(shù),。
10 使用菌落計數(shù)公式來確定活細(xì)胞計數(shù),。
注意
這個文檔整理的方法可以較準(zhǔn)確且便捷地測定特定條件下培養(yǎng)物的活菌濃度,，無
法計數(shù)培養(yǎng)物中的死菌濃度，同時也不能直接等同基因的拷貝數(shù),。實驗室常規(guī)的
定量操作可以參考本文檔,，國標(biāo)食品或環(huán)境檢測請按照標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。
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